小麦谷氨酰胺合成酶在氮素代谢中功能分析.pdfVIP

摘要 作物的氮素吸收、同化、转运以及氨基酸、蛋白质与核酸等含氮有机物合成是伴随作 物生长发育的、与氮素利用密切相关的重要的氮素代谢过程。前人利用基因突变与过表达、 QTL定位和植物生理学的方法证明谷氨酰胺合成酶(GS)及其活性与氮素利用及产量性状 显著正相关；利用免疫组化、层析以及westem-blot等细胞与生物化学技术阐明GS2定位于 叶绿体及线粒体中，与氮素的同化相关；GSl定位于维管束组织的细胞液中，与氮素转移再 利用相关，但在酶水平上尚未阐明不同的胞液Gs同工酶在氮素代谢中的作用。我们利用 native．PAGE结合活性染色技术首次从小麦中分离了一4种迁移率和活性不同的Gs同工酶， 定位等进行鉴定，并从小麦生长发育的角度解析其在氮素吸收、同化及在转移过程中的作用。 利用差速离心和密度离心技术纯化了小麦叶片的叶绿体和线粒体， native结合 活性染色及、veStemblot研究表明迁移率最大、活性最高的GS2仅存在于叶绿体内，由45l(D 分别回收GS同工酶，利用westemblot鉴定GS同工酶的亚基组成，结果表明GSl由38kD 基组成。 依据westem 为4．7-5．9范围内的蛋白点进行鉴定，结果显示为质体型Gs，在38kD附近没有鉴定到胞液 质体型GS2一致，GSl中的鉴定中出现了GSl、GSrl和GSr2三种蛋白 小麦GS同工酶时空表达研究表明，在茎中，GSl活性在不同生长发育时期均处于主 导地位，GS2，GSxl、GSX2仅在绿色茎中有较弱的表达；茎中含有丰富的维管束，主要起 运输作用，进一步证明GSl与氮素转移有关。在叶片中，GS2活性在功能叶中处于主导地 位，随着植株的衰老逐渐减弱直至消失。功能叶光合作用旺盛，叶绿体是光合作用和NO，一 还原的场所，为氮素同化提供原料和能量，也证明GS2参与氮素同化。GSl在叶片的整个 生长发育期均有较弱的活性，可能因叶片光合组织比输导组织发达之故。GSl将功能叶同化 氮素向生长发育的器官运输，也将衰老叶片中含氮化合物降解释放的氨重新同化为谷氨酰胺 再转运到籽粒等库器官中。GSxl仅存在于功能盛期的叶片中但活性很高，如开花期至花后 14天的旗叶，功能盛期叶片光呼吸作用旺盛，推测其参与光呼吸释放氨的同化利用。GS】【2 仅存在于花后7天的叶片中且活性很弱，尚无法推测其功能。籽粒中只有GSl活性，在籽 粒形成期活性很高，随后减弱；但其亚基组成却与茎叶中差异很大。开花后7d的籽粒GSl 后21d和28d又多了33kD亚基。籽粒没有微管组织，GSl的功能尚无法确定。 关键词：小麦谷氨酰胺合成酶表达定位鉴定功能 2 英文摘要 t啪slocationof aIldttlefomationof Abstract：The舔similation，absortion’andni仃09en amino a11dotller arecmcialf．0r are acid，肚in nitrogenouso唱aIliccompo咖ds cmps，which are tothe associatedwiththe and of related gro、Ⅳth deVelopmentcrop锄dclosely nitrogen themethodsof mutationwithexcessiVe locationand utilization．Throughgene expression，Q7rL andits haVeaflobVious haVe thatGS actiVities plantphysi0109