小麦木聚糖酶抑制蛋白纯化及TLXI基因克隆与表达.pdfVIP

微生物学硕士论文 小麦木聚糖酶抑制蛋白的纯化及TLXI基因的克隆与表达 捅晏 由于木聚糖酶能将木聚糖降解成低聚木糖，其在造纸、食品、饲料等行业中显示了广阔 的应用前景。然而很多谷物中存在木聚糖酶抑制蛋白，这种蛋白能阻碍木聚糖酶活性的充分 发挥从而降低木聚糖酶的应用效率。本实验用亲和吸附的方法提取小麦籽粒中的木聚糖酶抑 制蛋白，并从小麦品种郑麦9023幼胚中克隆得到木聚糖酶抑制蛋白基因出f，并将其在毕赤 酵母和大肠杆菌表达系统中进行表达。结果如下： (1)小麦籽粒木聚糖酶抑制蛋白热稳定性的研究：本试验对国产小麦郑麦9023、豫麦979， 冀麦22三个品种的小麦籽粒中木聚糖酶抑制蛋白的热稳定性进行了研究，结果显示：保温 时残余活力都达到最大值。在loo℃保温后，郑麦9023中抑制活性最高，而在冀麦22中几乎 检测不到抑制活性，即郑麦9023籽粒中的木聚糖酶抑制蛋白热稳定性最好。 (2)木聚糖酶固定化及小麦木聚糖酶抑制蛋白的亲和吸附条件的优化：通过对固定木聚 糖酶条件的优化，结果可知戊二醛添加量、壳聚糖与戊二醛交联时间、酶固定化pH和时间 分别是50ml／L、16h、pH5．5和24h时，壳聚糖交联戊二醛载体对木聚糖酶固定化效果最好。 并且在pH6．5、温度30℃，小麦籽粒粗蛋白提取液与固定化木聚糖酶作用50mill时，抑制剂 的吸附率可达到最大值。同时在pH8．5时酶与抑制剂的结合物可达到最大程度的分离。 (3)小麦木聚糖酶抑制蛋白腑基因的克隆：提取郑麦9023籽粒灌浆期胚中的总RNA， 利用RT-PcR得到cDNA，将其作为模板，根据G∞eB柚k中已知的成熟小麦木聚糖酶抑制 蛋白的基因序列设计引物克隆得到出f基因，将测序结果与已知序列比对后有一个核苷酸不 同，将所得序列递交到GenBalll(获取序列号JQ707892。 (4)木聚糖酶抑制蛋白基因腑在毕赤酵母中的表达：将出f基因构建到载体pPIC9K上， 利用酿酒酵母a因子信号肽使其在巴斯德毕赤酵母GSl15中表达。 (5)木聚糖酶抑制蛋白出f基因在大肠杆菌中的表达：将出f基因构建到原核表达载体 pE■2l《+)上，．转入E∞，fBL21(DE3)获得重组菌株，进行诱导表达。 关键词：；亲和吸附：木聚糖酶：木聚糖酶抑制蛋白；表达；毕赤酵母 1 !!!丝学硕士论文 小麦木聚糖酶抑制蛋白的纯化及TL×l基因的克隆与表达 PURIFICATIONOFTHEXYLANA SED娃缸BITORFROM WHEATANDCLoNINGAND EXPRESSIONTLXIGENE SuperVisor：Pro￡Chen Hongge Master Candidate：Li Xueqin ABSTRACT：The of incrcased industrial印plicationXylanase significantJy，and haSshowna inthe xylaIlase broad印plication other prospectspaper，food，feed，柚d i1111ibitors whichexistin caninhibit industries．HoweVer，xylanase manygrains soastoreducethe xylanase