肺癌患者深部真菌感染及病原菌的FCM和RAPD分析.pdfVIP

中文摘要 肺癌患者深部真菌感染及病原菌的 FCM和RAPD分析 摘 要 目的：肺癌患者深部真菌感染明显增多，感染一旦发生， 则导致病情更加严重。目前，对肺癌患者深部真菌感染的研 究主要集中在临床分析，在临床分析中对病因以及发生机制 的研究又主要集中在危险因素(诱因)，而对病原菌株(原 因)研究得较少，且主要集中于其形态学表型分型。本研究 运用病例分析的方法对肺癌患者深部真菌感染的病原菌及其 在发病中的作用作进一步分析，并采用流式细胞计数技术 (Flow Ctometry，FCM)、随机扩增多态性DNA分析技术 DNA，RAPD)，以健康人 Polymorphic (RandomlyAmplified 口腔非致病性白念珠菌作对照，在细胞生物学及分子生物学 水平对肺癌患者深部真菌感染的主要病原菌一白念珠菌进行 研究，以探讨肺癌患者深部真菌感染在发生发展过程中病原 菌的变化及其与发病的关系。 方法：选择有深部真菌感染临床表现并经微生物学检查 或治疗排除了其它微生物感染的肺癌患者，共43例，其中男 性31例，女性12例，年龄45～90岁，平均61．9岁。采集和 处理临床标本并进行真菌的直接镜检，用沙氏培养基、芽管 形成试验和科玛嘉念珠菌显色培养基进行真菌的培养、鉴定； 制备单细胞悬液、溴化乙啶(EB)一步插入法对DNA进行 染色、采用美国BD公司生产的FACS420型流式细胞仪，用 FCM对肺癌患者深部真菌感染白念珠菌和健康人口腔非致病 中文摘要 性白念珠菌的总DNA含量、增殖指数(PI)及细胞周期进行 测量；制备菌液、提取基因组DNA并进行鉴定、选择并合成 两条随机引物、低温下退火、扩增产物在1，5％的琼脂糖凝胶 中进行电泳，用RAPD的方法对肺癌患者深部真菌感染白念 珠菌和健康人口腔非致病性白念珠菌的基因进行分析。FCM 结果采用SAS统计软件t检验进行统计学分析，RAPD结果 采用SAS统计软件矿检验进行统计学分析，检验水准定为 0．05。 结果；肺癌患者深部真菌感染男性占72．09％，女性占 27，91％，男性多于女性；患者年龄45～90岁，平均61．9岁， 随着年龄的增大，感染病例增多。肺癌患者深部真菌感染主 要发生在呼吸道，占65．20％。感染的病原真菌主要是白念珠 菌，占48．90％，其次是光滑念珠菌(27．50％)、热带念珠菌 (12．70％)。稳定生长阶段的肺癌忠者深部真菌感染自念珠 菌和健康人口腔非致病性白念珠菌细胞大多数处于G0／G，期， 分别占77．08％和79．25％；病例组和对照组在Go／Gl、G2M期 的细胞比率经t检验(t值分别为2．012、0．570，P值分别为 0．054、0．573)，无统计学意义：S期细胞比率经t检验(t=2．150， P=0．040)，有统计学意义。病例组白念珠菌细胞的总DNA 含量平均为2．01pg，对照组平均为1．97pg，经t检验(产=1．234， P=0．227)，’无统计学意义；两组平均PI值分别为25．28％和 20．75％，PI值经f检验(f啦．183，P=0．038)，有统计学意义。 两条随机引物扩增的两组白念珠菌菌株之间条带的数量和扩 增片段的大小存在差异，即使带型完全一致的菌株，有些片 段的EB显色强度也有区别，但经，检验，两组菌株基因的 差异没有统计学意义。 中文摘要 结论：肺癌患者深部真菌感染，男性多于女性，随着年 龄的增大，感染更容易发生。感染的部位主要在呼吸道。白 念珠茵仍然是最常见的致病菌，但其在分离菌株中所占的比 例已下降，而非自念珠菌在临床标本中占的比例显著增加， 光滑念珠菌居第一，热带念珠菌居第二，两者之和接近于白 念珠菌之所占比例。非白念珠菌构成比的增加，明显有异于 以往白念珠菌占绝大多数的局耐，产生了菌种的变迁。稳定 生长阶段的肺癌患者深部真菌感染白念珠菌和健康人口腔非 致病性白念珠菌细胞绝大多数处于60／Gl期。肺癌患者深部真 菌感染自念珠菌进入DNA合成期的细胞多，增殖活性增强， 发生了致病力的变化，但肺癌患者深部真菌感染白念珠菌的 基因在疾病的发生、发展过程中基本稳定。因此，肺癌患者 深