二甲双胍联合吉西他滨抑制人胰腺癌细胞株CFPAC-1生长及机制的实验的研究.pdfVIP

二甲双胍联合吉西他滨抑制人胰腺癌细胞株CFPAC-1生长及机制的实验研究 中文摘要 二甲双胍联合吉西他滨抑制人胰腺癌细胞株CFPAC-1生 长及机制的实验研究 中文摘要 第一部分 二甲双胍对人胰腺癌细胞株CFPAC-1的影响及机制 目的：研究二甲双胍 （Metformin，Met）在体外对人胰腺癌细胞株CFPAC-1生 长增殖、凋亡的影响，并初步探讨其可能的作用机制。 方法：在体外培养人胰腺癌细胞株CFPAC-1，应用不同浓度的Met(0、1、2.5、5、 10、20、40、60mmol/L)进行干预24、48、72h。用细胞增殖与毒性检测法 （CCK-8） 检测OD值，计算对照组和各实验组CFPAC-1细胞的抑制率，并计算最适宜的Met IC50；取Met浓度为0、10、20、40mmol/L处理胰腺癌CFPAC-1细胞48h后进行流 式细胞术分析细胞周期变化；AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡率；反转录聚合酶链 反应（ReverseTranscriptionPolymeraseChainReaction，RT-PCR）检测FASmRNA、 CyclinD1mRNA、Bcl-xlmRNA、BaxmRNA、SurvivinmRNA、Caspase-3mRNA表 达水平的变化；蛋白质印迹法（Westernblot）检测P-AMPK、FAS、CyclinD1、Bcl-xl、 Bax、Survivin、Caspase-3蛋白表达变化。 结果：（1）CCK-8法显示Met可明显抑制CFPAC-1细胞的增殖，呈浓度—时间 依赖性 （P0.05）。（2）流式细胞术及 AnnexinV/PI 早期凋亡检测显示：CFPAC-1细 胞经Met作用 48小时后，细胞周期G/G 期比例上升，从(42.89±1.02)%上升至(65.98 0 1 ±0.27)%，（P0.05）。细胞凋亡明显，以早期凋亡为主，10mmol/L浓度下早期凋亡 率为(13.77±1.31)%，20mmol/L浓度下为(22.63±1.45)%，而40mmol/L浓度下为(32.97 ±3.19)%，凋亡率与Met浓度呈正相关（P0.05）。（3）RT-PCR检测FASmRNA、 CyclinD1mRNA、Bcl-xlmRNA、BaxmRNA、SurvivinmRNA、Caspase-3mRNA表 明CFPAC-1细胞经Met作用48小时后，FASmRNA、CyclinD1mRNA、Bcl-xlmRNA、 SurvivinmRNA 的表达呈浓度依赖性下降，BaxmRNA、Caspase-3mRNA呈浓度依赖 性上升，各浓度组与对照组比较差异有统计学意义 （P0.05）。（4）WesternBlot 结果 I 中文摘要 二甲双胍联合吉西他滨抑制人胰腺癌细胞株CFPAC-1生长及机制的实验研究 显示Met作用于CFPAC-1细胞48h后可使细胞中的P-AMPK蛋白表达增强，FAS、 CyclinD1表达减弱；Bcl-xl、Survivin 表达下调，Bax、Caspase-3表达上调，差异具 有统计学意义（P0.05）。 结论：Met呈浓度—时间依赖性抑制胰腺癌CFPAC-1细胞的生长，其机制可能 是激活AMPK信号通路，从而下调FAS表达影响细胞代谢、下调CyclinD1表达阻 滞细胞周期于G/G 期从而抑制细胞增殖；并且还能诱导细胞发生早期凋亡。 0 1 关键词：二甲双胍；胰腺癌；AMPK信号通路；细胞增殖；凋亡 第二部分 二甲双胍联合吉西他滨对人胰腺癌细胞株CFPAC-1的影响 目的: 探讨二甲双胍联合吉西他滨（Gemcitabine，GEM）对人胰腺癌细胞株 CFPAC-1的协同抑制作用及可能机制。 方法: 以浓度为20mmol/L 的二甲双胍联合低浓度（5µmol/L）的吉西他滨处理对 数生长期的人胰腺癌细胞株CFPAC-1，应用CCK-8法检测OD值，计算对照组和各 实验组CFPAC-1细胞的增殖抑制率；AnnexinV/PI双染法检测细胞早期凋亡情况； RT-PCR检测细胞凋亡因子Bcl-xl、Bax、Surviv