桂枝汤调和营卫与痹证小鼠肠粘膜免疫关系初探.pdf

中文摘要 目的 本研究以调和营卫代表方剂桂枝汤作为工具处方，以黏膜免疫学指标作 为检测对象，以与营卫不和密切相关的痹证作为研究对象，采用胶原免疫性 关节炎作为动物模型，目的在于研究调和营卫与黏膜免疫的关系． 材料和方法 选用雄性DBA小鼠80只，随机分为四组，每组20只，分别为正常 组、模型组、桂枝汤高剂量组、桂枝汤低剂量组。模型组、桂枝汤高剂量 组、桂枝汤低剂量组以II胶原和完全弗氏佐剂充分乳化后足底皮下注射免 疫造成痹证动物模型，正常组动物足底注射生理盐水假免疫。免疫后第十 天开始关节炎指数积分，两周后桂枝汤高、低剂量组动物分别给予不同剂 量的桂枝汤灌胃，正常组及模型组给予生理盐水灌胃作为对照．灌药时间 共三周，停药后两周取血，处死小鼠取材．以后用病理学方法观察动物关 节病理形态变化，用ELIsA、放射免疫学方法检测血清中抗，CII抗体、IFN． v、IL-1 D，IL-6、TNF-0【等细胞因子含量，用免疫荧光标记法检测金血 中T细胞亚群，用MTT法测定脾脏中T、B淋巴细胞增殖功能，用免疫组 织化学染色法观察肠黏膜及PP结中cD4+和cD81淋巴细胞及sIgA的数 量。 结果。 1．不同组别小鼠关节炎指数积分的变化 经II型胶原加完全弗氏佐剂免疫后的第1．2周模型组、桂枝汤高剂量 组、桂枝汤低剂量组三组小鼠关节炎指数积分相同，表明在未用桂枝汤时 这三组小鼠有相同的发病趋势，从第三周开始给桂枝汤高、低剂量组小鼠 灌服相应剂量的桂枝汤，之后其关节炎指数积分与模型组比较上升趋势都 减缓． 2．不同组别小鼠膝、踝关节光镜观察 正常组：膝、踝关节结构正常，各关节软骨表面光滑，软骨无退行性交， 滑膜组织无增生，骺板整齐，关节腔内干净，关节周围软组织未见异常． 模型组：踝关节：周围软组织内血管扩张充血，结缔组织疏松水肿， 伴有大量淋巴细胞、单核细胞及中性粒细胞漫润，可见散在噬酸性粒细胞． 关节腔及滑囊内均可见明显的滑膜细胞增生。呈乳突状，滑膜组织内见有 新生毛细血管及成纤维细胞，并伴有淋巴细胞浸润．胫距骨关节软骨基质 及软骨细胞变性融合．膝关节：膝关节腔内可见滑膜组织增生，关节软骨 变性剥脱，软骨表面可见由滑膜细胞和毛细血管增生所形成的血管翳。 桂枝汤高剂量组：膝关节有轻度的滑膜细胞增生，未见软骨的变性及 血管翳形成．踝关节周围软组织内也可见炎性细胞浸润，轻度软骨变性及 滑膜增生，未见血管翳形成． ． 桂枝汤低剂量组：膝关节关节软骨基质及软骨细胞变性，有滑膜组织 增生，未见血管翳形成．踝关节周围软组织有淋巴细胞、单核细胞及中性 粒细胞漫润，滑膜增生较桂技汤高剂量组严重，有早期血管翳形成。 3．各组小鼠胭窝淋巴结的变化 正常组小鼠胭窝淋巴结明显小于模型组、桂枝汤高剂量组及桂枝汤低 剂量组，且正常组小鼠淋巴结内淋巴滤泡数低于模型组及桂枝汤高，低剂 量组，淋巴结内细胞分布正常组也较模型组、桂枝汤高剂量组、桂枝汤低 剂量组疏松。 4．桂枝汤对小鼠外周血清中抗．cⅡ抗体、刀FN．Y浓度的影响 抗．CII抗体：统计分析模型组高于正常组(P0．01)，桂枝汤低剂量组高 于正常组(P《o．01)．模型组高于桂枝汤高剂量组(Po．05)，而模型组与桂 枝汤低剂量组比较无显著性差异(P0．05)。桂枝汤高、低剂量组问比较 无统计学意义． IFN．丫：模型组高于正常组(P0．05)，桂枝汤高、低剂量组与正常组闯 比较无显著性差异．模型组高于桂枝汤高剂量组@0．05)，模型组与桂枝 汤低剂量组比较无统计学差异．桂枝汤高、低剂量组闻比较无显著性差异。 5．桂枝汤对小鼠外周血清中Ⅱ，l D．也．6、TNF．o【浓度的影响 IL·lp：与正常组比较：模型组高于正常对照组口0．05)，桂枝汤高、 低剂量组与正常组闻比较无显著性差异．与模型组比较：桂枝汤高、低剂 量组与模型组问比较无统计学意义．桂枝汤高剂量组与桂枝汤低剂量组问 无显著性差异。 IL-6：模型组高于正常组口o．05)，桂枝汤低剂量组高于正常组，有统 计学意义，口0．05)．模型组高于桂枝汤高剂量组口o．01)，模型组与桂枝 汤低剂量组阔无显著性差异．桂技汤高剂量组低于桂枝汤低剂组(P