棉纤维特异表达基因及启动子的克隆.pdfVIP

摘 要 中国虽然是世界最大的棉花生产国和消费国，但在棉花纤维的内在品质方面却与美国等其它 一些产棉国存在很大差距，因此，培育品质优良的棉花是当前棉花育种的一项紧迫的任务，但由 于棉花纤维品质与产量之间的遗传负相关性，给用传统育种技术同步改良纤维品质与产量带来了 很大的障碍，纤维品质改良进展缓慢。 基冈工程作为棉纤维品质改良的一个新的研究领域，有两条途径，一是分离鉴定出与纤维品 质相关的基因，深入了解棉纤维发育的分子机制，通过增加和减少这些与棉纤维品质相关的蛋白 质或酶的表达水平，来达到改良纤维品质的目的，另一途径是从其它生物中选择有潜力的目的基 因，将其导入棉花，以提高纤维品质。组成型启动子CaMV35S虽然能驱动外源基因的稳定表达， 但其在整个植株中的表达消耗了棉花体内大量的基础物质，也影响了植物的生长发育。因此，克 隆在棉纤维中特异表达的启动子将为遗传工程改良棉纤维提供有效的工具，在品质改良中具有重 要的实际意义。 本研究以陆地棉苏12为试材，对叶片和纤维进行差减杂交，得到lO条在棉纤维中差异表达 的片断并克隆得到其中一条GhTIP的基因全长及其部分启动子序列，研究结果如下： (1) 优化了棉花mRNA差异显示体系，利用改良的CTAB法分别提取棉花叶片和纤维的总 得到适合比较棉花纤维和叶片的差减体系。 (2) 通过mRNA差异显示技术，共获得24个差异条带。经过反向斑点杂交的筛选，得到10 条棉纤维特异表达片段，通过NCBI的Blastx和Blastn，对他们进行了初步分析。 (3) cDNA，Blastn分析发现它是编码酪氨酸激酶相互作用蛋白Y．亚基的基因Gh7，P，通过与DNA 序列比对，发现它含有两段内含子区。 (4) 经染色体步移技术得剑GhTIP基因部分5’端上游序列，经PlantCARE分析结果表明： 此序列中含有TATA．box、CAAT．box及HSE、Spl、GTl等启动调控元件。 (5) 将获得的Gh卿基冈部分启动子序列和Gus基因连接，构建植物表达载体，转入烟草。 转基因烟草的GUS组织化学染色确定了本段序列的启动功能。 关键词：mRNA差异显示，组织特异性，启动子 Abstract fiber Chinaisthe coRon and inthe the is countryworld，but quality largest producingconsuming notas asthatoftheU．S．andother countries．Soit’Sall tasktodevelop good cotton—producing urgent newcottonvarietieswith fiber traditional is techniques，itvery improvedquality．Throughbreeding increase difficultto thefiber and cotton simultaneously． improve quality production to fiber is Two canbeusedimprovequalitythroughgeneticengineering．Onestrategy strategies and fiber themolecularmechanismsofcoRonfiber