源于马铃薯的多酚氧化酶活性中心必需基团组成与抑制机理.pdfVIP

化 工 进 展 ·406 · CHEMICALINDUSTRYAND ENGNIEERINGPROGRESS 2012年第31卷第 2期 源于马铃薯的多酚氧化酶活性中心必需基团组成与~[pStJ机理 彭益强，刘 鹏 ，邓 峰，刘 宇 (华侨大学工业生物技术福建省高等学校重点实验，福建 厦门 361021) 摘 要：探讨源于马铃薯多酚氧化酶 (PPO)的酶活性中心必需基团组成与抑制剂对 PPO 的抑制作用类型。应 用具有相对专一性的氨基酸基团化学修饰剂溴乙酸 (BrAC)、乙酰丙酮 (Hacac)、N-溴代琥珀酰亚胺 (NBS)、 14-二硫代苏糖醇 (DTT)与对氯汞苯甲酸 (pCMB)等对PPO进行化学修饰反应，确定源于马铃薯的多酚氧化 酶活性中心必需基团组成为组氨酸 (His)的咪唑基、精氨酸 (Arg)的胍基与色氨酸 (Trp)残基，二硫键对酶 活性中心的稳定有贡献作用但游离的硫基不是酶反应所必需的基团。抑制动力学实验表明乙醇对 PPO的半抑制 浓度 (Ics0)为0．12mmol／L，抑制类型为竞争性可逆抑制，苯甲酸对 PPO的Ic50为0．07mmol／L，抑制类型为 非竞争性可逆抑制。说明乙醇通过与 PPO酶活中心结合抑制 PPO酶活性而苯甲酸则通过与PPO非酶活中心的 结合抑制PPO酶活。 关键词：多酚氧化酶；酶活性中心；必需基团；可逆抑制；马铃薯 中图分类号：O554 文献标志码：A 文章编号：1000—6613(2012)02—0406—06 Enzymeactivecenteressentialgroupscompositionandinhibitory mechanism researchofpolyphenoloxidasefrom potato PENGYiqiang，LIUPeng，DENFeng，LIU (ProvincialKeyLaboratoryofIndustrialBiotechnology，HuaqiaoUniversity，Xiamen361021，Fujian，China) Abstract：Theenzymeactivecenteressentialgroupsofpolyphenoloxidase(PPO)from potatoandits inhibitorymechanism wereinvestigated．TheessentialgroupsofPPO activecenteraredeterminedthat imidazoleOfHis，guanidinium ofArgandTrpresidue，disulfidebondhavecontributiontothestability ofactivecentrestructurebutdissociativesulfhydrylgroup isnottheessentialgroupforPPO react activity．TheseareconcludedbytheresultofusingchemicalmodifierssuchasBrAC，Hacac，NBS， DTT andpCMB reactwith PPO sincetheyhaverelativespecificitytocorrespondaminoacidactive group．Inhibitkineticsexperimentsshow thatthe50％enzymeactivityihn ibitconcentration (IC5o)of ethanolandbenzoicacidare0．12mmol／Land0．07mmolL／respectively，theihn ibitorymechanism of ethanolandbenzoicacidto PP0 arecompetitiveandnoncompetitivereversible ihn ibition．These resultsshow thatethanolinhibitsPPOactivitybycombin