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专题1 基因工程 基因工程的概念：基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过______和________技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在____水平上进行设计和施工的，又叫做_____技术 （一）基因工程的基本工具 1.“分子手术刀”——是________________________ （1）来源：主要是从________中分离纯化出来的。 （2）功能：能够识别_____分子的某种______序列，并且使每一条链中特定部位的两个______之间的_______断开，因此具有______性。 （3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：_______和________，当限制酶在它识别序列的中心轴线两侧将DNA的两条链分别切开时，产生的是_____末端。而当限制酶在它识别序列的中心轴线处切开时，产生的是___末端。 2.“分子缝合针”——是__________ (1)两种DNA连接酶（E·coliDNA连接酶和T4-DNA连接酶）的比较： ①相同点：都是将双链DNA分子片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开了的两个________之间的__________ ②区别：E·coliDNA连接酶来源于________，只能将双链DNA片段互补的_____末端之间连接起来；不能将双链DNA片段___末端之间进行。而T4DNA连接酶是从________中分离出来的，能缝合_____末端，但连接平末端的之间的效率较___ （2）与DNA聚合酶作用的异同:DNA聚合酶只能将_______加到已有的核苷酸片段的末端，形成____键。DNA连接酶是连接_____的末端，形成_____键。 DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？ （连接酶是连接双链DNA的缺口，而不能连接单链DNA。DNA连接酶和DNA聚合酶都是形成磷酸二酯键。不同点：（1）DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段的3′末端的羟基上，形成磷酸二酯键；而DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，（2）DNA聚合酶是以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的DNA链；而DNA连接酶是将DNA双链上的两个缺口同时连接起来。因此DNA连接酶不需要模板。此外，二者虽然都是由蛋白质构成的酶，但组成和性质各不相同。） 3.“分子运输车”——基因进入________的载体 （1）载体具备的条件主要有：______②具有_________，供外源DNA片段（基因）插入。③具有标记基因，______ （2）最常用的载体是______,它是一种裸露的、结构简单的、独立于拟核DNA之外，并具有______能力的______分子。 天然的DNA分子可以直接用做基因工程载体吗？ （作为基因工程使用的载体必需满足以下条件：（1） 载体DNA必需有一个或多个限制酶的切割位点，以便目的基因可以插入到载体上去。这些供目的基因插入的限制酶的切点所处的位置，还必须是在质粒本身需要的基因片段之外，这样才不至于因目的基因的插入而失活。（2） 载体DNA必需具备自我复制的能力，或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA的复制而同步复制。（3） 载体DNA必需带有标记基因，以便重组后进行重组子的筛选。（4） 载体DNA必需是安全的，不会对受体细胞有害，或不能进入到除受体细胞外的其他生物细胞中去。（5） 载体DNA分子大小应适合，以便提取和在体外进行操作，太大就不便操作。实际上自然存在的质粒DNA分子并不完全具备上述条件，都要进行人工改造后才能用于基因工程操作） (二)基因工程的基本操作程序： （1）_______（2）____________（3）__________（4）____________ 第一步目的基因的获取：目的基因可以从______分离，也可以_______。目的基因主要是指______，也可以是____。获取目的基因目前常用的方法：________、_________、 _______。 目的基因的获取依据：根据基因的有关信息：基因的 序列、基因在上的位置、基因的 产物mRNA、基因的产物蛋白质等特性获取目的基因。 文库类型 cDNA文库 基因组文库 文库大小 基因中启动子(具有启动作用的DNA片段) 基因中内含子(位于编码蛋白质序列内的非编码DNA片段) 基因多少 物种间的基因交流 利用大肠杆菌可以生产出人的胰岛素，若要生产人的糖蛋白，可以用大肠杆菌吗？ 提示：有些蛋白质肽链上有共价结合的糖链，这些糖链是在内质网和高尔基复合体上加工完成的，内质网和高尔基复合体存在于真核细胞中，大肠杆菌不存在这两种细胞器，因此，在大