非粮淀粉免蒸煮酒精发酵工艺的基础技术研究.docVIP

第一章 绪论 第二章 传统酒精发酵工艺研究 2.1 淀粉液化工艺 2.1.1 α-淀粉酶活测定 l)酶活定义lg固体酶在70℃，pH=6.0条件下，1min液化可溶性淀粉lmg， 即为1个酶活力单位以U·g-1表示。 2)试剂配制 a.碘原液:称取碘11g，碘化钾22g于200mL烧杯中，加少量 蒸馏水溶解，再移入500mL棕色容量瓶中加水定容至刻度。b.稀碘液:取碘原 液1.00mL，碘化钾10g，加水定容至250mL；试剂随配随用。c.2%淀粉液:称 取烘至恒重的可溶性淀粉5g，移入250mL烧杯，用少量蒸馏水调匀，用100mL 沸水冲入250mL烧杯中，再加热煮沸至透明为止，冷却，加水定容至250mL， 配制后在室温保存条件下不超过48h。d.磷酸氢二钠一柠檬酸缓冲溶液(pH=6.0): 称取磷酸氢二钠45.23g、柠檬酸8.57g，用水溶解并定容至1000mL，配好后用 pH计校正。 3)酶活测定 称取酶1~2g，先用少量pH=6.0的磷酸缓冲液溶解，并用玻棒 捣研，将上清液小心倒入容量瓶中，沉渣部分再加入少量缓冲液，如此研磨3~ 4次，最后全部移入容量瓶中，用缓冲液定容至刻度，摇匀，通过4层纱布过滤， 滤液供测定使用。 取20mL2%的可溶性淀粉和5mL pH= 6.0的磷酸氢二钠一柠檬酸缓冲液，放 于25mm×200mm大试管中，在70℃恒温水浴中预热4~5min，然后加稀释好 的酶液0.5mL，立即记录时间。充分摇匀，定时用滴管取出反应液0.5mL，滴于 预先充满比色稀碘液的白磁板空穴内。当颜色反应由紫色逐渐变为红棕色时，即 为反应终点，并记录时间。 4)酶活计算 (取20 mL 2％的可溶性淀粉和5 mL pH=5．5的磷酸氢二钠．柠檬酸缓冲液，放于25mmx20mm大试管中，在50℃恒温水浴中预热10min，然后加稀释好的酶液1．0 mL，立即记录时间，准确反应5 min。立即吸取反应液1.0 mL加入到5 mL稀碘液中，以稀碘液作空白，在660 nm波长下比色，迅速测定吸光度值，根据吸光度值查表，求得测试酶液的浓度(Ce)，通过公式计算出样品的酶活力。 酶活计算 X= Ce×n 式中，X——样品的酶活力(U·mL-1)； Ce一测试酶液的浓度(g·mL-1)； n—样品稀释倍数。） 2.1.2 液化反应终点测定 测定液化反应终点(碘反应) 取淀粉液化液数滴，滴加碘液进行检测。 淀粉在α-淀粉酶的作用下，随着水解程度的加深，其碘色反应发生如下变化：蓝→紫→红→浅红→不显色(即碘原色)。 2.1.3 淀粉液化 称取50.0g薯干粉，按料水比1（g）:3.0（mL）与水均匀混合于500mL 的三角瓶中，盐酸调节pH到5.5~6.9，加入10U/gα—淀粉酶，0.5g CaCl2，于沸水浴中液化1h（碘液检测反应终点）。 2.2 淀粉糖化工艺 2.2.1 葡萄糖淀粉酶活测定 糖化酶活力定义：1g 干曲在35℃、pH4.6条件下，反应1h，将可溶性淀粉分解为葡萄糖1mg 所需的酶量称为1个酶活单位（U/g）。 2.2.2 糖化反应终点测定 糖化终点测定(无水乙醇检验) 取糖化液数滴，滴入无水乙醇中，看是否生成白色絮状物。若无白色絮状物生成，表明糖化比较彻底。 2.2.3 淀粉糖化 盐酸调节淀粉液化溶液pH到4.0~4.5，自然冷却至 60℃后，加入150U/g糖化酶，60℃糖化1h（无水乙醇检测反应终点）。 2.3 淀粉糖化液酒精发酵 2.3.1 酵母培养 1） 菌种与培养基 菌种：酿酒酵母(实验室保藏)。 平板保藏及活化培养基(g/L)：蛋白胨 20，酵母膏 10，葡萄糖 20，琼脂 20。 种子培养基(g/L)：葡萄糖 20，蛋白胨 20，酵母膏 10，自然 pH。(葡萄糖分开灭菌后再加入) 2）种子活化方法 接一环生长良好的斜面酵母至50 mL/250 mL 的培养基中，30℃，100 r/min，于摇床上活化 24 h。 3） 种子培养基的摇瓶培养法 将活化后的种子液以10 %的接种量接入到 50 mL/250 mL 的种子培养基中，30 ℃，100 r/min，于摇床上培养12 h。 2.3.2 酒精发酵 盐酸调节pH到4.8~5.0，加入0.5﹪尿素，其它营养因子，（高压灭菌）。待糖化醪液冷却至30℃，加入10﹪酵母种子液和塞上发酵栓于30℃静置发酵72h，取液体测量酒精的体积分数和糖含量。 第三章 球磨机械活化对酒精发酵的影响 3.1 球磨处理对淀粉颗粒性质的影响 3.1.1 淀粉颗粒表面形貌观察 将处理后淀粉样品置于105℃烘箱中干燥4一sh，在红外灯下用导电胶将样品固定在样品台上，然后喷金，将处理后的样品保存于干燥器中。将待测样品置于扫描电子显微镜中观察，拍摄具有代表性的淀粉颗