体外诱导胎肝间充质干细胞向胰岛β细胞分化的实验研究.pdfVIP

硕十论文 在体外诱导胎肝闯充质干细胞向胰岛母细胞分化的实验研究 摘要 目的：研究小鼠胎肝间充质干细胞是否具有向胰岛13样细胞分化的潜能及是 否可用于治疗1型糖尿病。 方法：无菌条件下，通过贴壁筛选法从正常C57BL／6j胎鼠(孕11．5～15。5天) 肝脏中分离出胎肝间充质细胞，在DMEM／F12(+10％FBS)培养液中贴壁培养；传 FibroblastGrowth Factor)和尼克酰胺诱导胎肝问充质干细胞向胰岛B样细胞分 化。倒置显微镜下观察胎肝间充质干细胞诱导后形态变化，观察是否形成细胞簇： 用RT—PCR检测诱导后的细胞是否表达胰岛B细胞的特异分子标志如胰十二指肠 duodenal 同源异型看家基因盒一1(pancreatichomeobox一1，PDX．1)、胰岛素原．1 (proinsulin—l，INS一1)、葡萄糖转运子2(glucosetransporter-2，Glut2)；在诱导细 胞形成细胞簇后，用胰岛B细胞特异染色方法双硫腙染色鉴定诱导后细胞内是否 含有高浓度游离锌离子：免疫细胞化学(Envision法)鉴定诱导后细胞内是否储 存有胰岛素：制作l型糖尿病小鼠模型，并将诱导后的细胞移植到1型糖尿病小鼠 体内，连续6周观察血糖变化，鉴定细胞是否有葡萄糖反应性分泌胰岛素的功能。 结果：用经典的贴壁筛选法可以得到形态均一的纺锤体样胎肝间充质干细 胞。第3代胎肝问充质细胞经过高糖等诱导后，胎肝间充质细胞形成细胞簇； RT—PCR显示诱导后细胞PDX．1、INS一1、Glut2均有表达，而未诱导的细胞则没有 表达或末检测到表达；间充质干细胞形成了双硫腙染色阳性的细胞簇(每个T-25 培养瓶有80．120个)；免疫细胞化学表明细胞簇内的细胞胰岛素染色强阳性；移植 到糖尿病小鼠体内后，小鼠高血糖出现逆转；取出移植物，小鼠高血糖从新出现， 并很快死亡；移植物作免疫组织化学染色，可以观察到肾被膜下区含有大量胰岛 素阳性细胞，并且没有淋巴细胞浸润。 结论：从胎肝中分离出的间充质干细胞在体外可以定向诱导分化为胰岛p样 细胞，这种胰岛B样细胞具有表达、储存和葡糖糖反应性分泌胰岛素的功能。胎 肝间充质干细胞可能是糖尿病再生治疗的理想细胞来源。 关键词：胎肝间充质干细胞分化胰岛糖尿病 硕士论文 在体外诱导胎肝问充质干细胞向胰岛B细胞分化的实验研究 Abstract isolate stem fetalliverandinduce 0bjective：Tomesenchymalcells(MSCs)from them theseislet口．1ike differentiateintojslet8一likecells．Anddeterminewhether cellsareabletoreverse in 1 diabeticmice． hyperglycemiatype Methods：MSCswereisolatedfromC57BL／6JnlousefetalliverfElI．5-El 5．5)by adhesive methodandinduced Fibroblast screening byhi曲glucose，bFGF(basic inculturemedium．The relatedtoislet Growth expression Factor)，nicotamine gene pcellssuchas duodenal pancreatichomeobox一1(PDX一1)，pr