烟台黑猪SLA_2_YTH原核表达载体的构建及表达_姜巍.docVIP

中 国 畜 牧 兽 医 　２０１４ 年 第 ４１ 卷 第 ４ 期  生物技术  · ８５ ·  烟台黑猪 ＳＬＡ－２－ＹＴＨ 原核表达载体的构建及表达 姜巍１，董宋鹏１，李子彬１，２，姜龙３，冯磊１，高凤山１ （ ．大 连 大 学 生 命 科 学 与 技 术 学 院 ，辽 宁 大 连 　１１６６２２； ．吉 林 农 业 大 学 生 命 科 学 学 院 ，吉 林 长 春 　１３０１１８； ３．河 北 省 涿 鹿 县 医 院 ，河 北 涿 鹿 　０７５６００） 摘要 ：为 构 建 烟 台 黑 猪 ＳＬＡ－２－ＹＴＨ 基 因 原 核 表 达 载 体 ，本 研 究 设 计 引 物 ＰＣＲ 扩 增 ＳＬＡ－２－ＹＴＨ 胞 外 区 ，将 其 克 隆 至 ｐＭＤ?１９－Ｔ　ｉｍｐｌ 载 体 ，筛 选 阳 性 克 隆 。 阳 性 克 隆 经 酶 切 后 ，进 一 步 与 表 达 载 体 ｐＥＴ－２８ａ（＋ ）连 接 ，转 化 ＢＬ２１ Ｒｏｓｓｅｔａ）感 受 态 细 胞 并 进 行 诱 导 表 达 ，ＤＳ－ＰＡＧＥ 检 测 蛋 白 表 达 情 况 。 结 果 显 示 ，ＬＡ－２－ＹＴＨ 胞 外 区 亚 克 隆 大 小 为 ８３４ｂｐ，酶 切 鉴 定 证 实 其 成 功 插 入 ｐＥＴ－２８ａ（＋ ）表 达 载 体 。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ 结 果 显 示 ，ＬＡ－２－ＹＴＨ 基 因 导 入 宿 主 菌 后 成 功 表 达 ，蛋 白 大 小 约 ３１．０ｋｕ， 与 预 期 结 果 相 符 ，优 化 后 蛋 白 相 对 表 达 量 达 ２５％ 以 上 。 本 研 究 成 功 构 建 了 烟 台 黑 猪 ＳＬＡ－２－ＹＴＨ 原 核 表 达 载 体 ，获 得 了 表 达 蛋 白 ，为 今 后 进 一 步 的 结 构 和 功 能 研 究 奠 定 基 础 。 关键词 ：烟 台 黑 猪 ；猪 白 细 胞 抗 原 ；原 核 表 达 ；载 体 中图分类号 Ｑ７８　 　 　 　 　文献标识码 ： 　 　 　 　 　文章编号 ：６７１－７２３６（０１４）４－００８５－０４  　 　 脊 椎 动 物 主 要 组 织 相 容 性 复 合 体 （ｍａｏｒ　ｉｔｏ－ ｃｏｍｐａｔｂｉｉｙｃｏｍｐｌｅｘ，ＭＨＣ）是 一 类 表 达 于 有 核 细 胞 表 面 的 膜 糖 蛋 白 基 因 群 ，该 基 因 群 决 定 了 动 物 个 体 和 群 体 的 免 疫 应 答 差 异 ，在 免 疫 应 答 反 应 中 发 挥 着 重 要 的 作 用 。 猪 ＭＨＣ 又 称 作 猪 白 细 胞 抗 原 （ｗｉｎｅｌｅｕｋｏｃｙｔｅａｎｔｇｅｎ ＳＬＡ），简 称 ＳＬＡ 分 子 ， 共 分 为 ＳＬＡ－ 、ＳＬＡ－ 和 ＳＬＡ－ ３ 类 （Ｈｏ 等 ， ２０１０；冯 磊 等 ，０１２）。 其 中 ＳＬＡ－ 类 基 因 编 码 细 胞 表 面 高 度 多 态 的 糖 蛋 白 ，负 责 将 内 源 性 抗 原 肽 递 呈 给 Ｔ 细 胞 ，激 发 特 异 的 细 胞 免 疫 反 应 （Ｇａｏ 等 ， ２００９；Ｔａｎａｋａ－Ｍａｔｓｕｄａ 等 ，２００９）。ＳＬＡ－ 分 为 重 链 和 轻 链 ，重 链 分 子 含 有 ３ 个 功 能 基 因 ，分 别 称 为 ＳＬＡ－１、ＳＬＡ－２ 和 ＳＬＡ－３。 其 中 ，ＳＬＡ－２ 比 ＳＬＡ－１ 和 ＳＬＡ－３在 信 号 肽 的 起 始 端 多 ３ 个 氨 基 酸 ，可 在 体 外结 合 抗 原 Ｇａｏ等 ，０１２）。 近 年 来 ，由 于 家 畜 疫 病 频 繁 暴 发 ，对 畜 牧 业 生 产 和 人 类 健 康 造 成 了 极 大 威 胁 ，抗 病 育 种 已 渐 渐 成 为 人 们 最 关 心 的 研 究 课 题 之 一 。 由 于 ＳＬＡ－ 类 基 因 与 家 畜 抗 病 性 密 切 相 关 ，其 重要 性 也 日 益 突 出 ，对 其 基 因 结 构 、多 态 性 、表 达 及 进化等方面的研究正逐渐展开 。 大连大学分子免疫 学实验室已完成了中国地方品系荷包猪及国外品系 收稿日期 ：０１３－１１－１４ 作者简 介 ：姜 巍 （９９１—），男 ，辽 宁 人 ，学 士 ，研 究 方 向 ：生 物 工程 。 通信作者 ：高 凤 山（９７１—），男 ，河 北 人 ，副 教 授 ，硕 士 生 导 师 ，研 究 方 向 ：分 子 免 疫 学 和 分 子 生 物 学 。 Ｔｅ：０４１１－ －ｍａｌ：ｇｆｓｈ０６２６＠１２６．ｃｏｍ 基金项目 ：国 家 自 然 科 学 基 金 项 目 （１１７２３０４）；地 方 高 校 国 家 级 大 学 生 创 新 创 业 训 练 计 划 （０１２１１２５８００６）。  托 佩 克 猪 Ｓ