热休克蛋白90的N端与ATP类似物的晶体结构揭示其功能调控.pdfVIP

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2012, 39(10): 995~1002 热休克蛋白 的 端与 类似物的晶体 90 N ATP 结构揭示其功能调控* 健 孙丽华 徐春艳 郁 峰 周 欢 唐 琳 何建华** ( 中国科学院上海应用物理研究所，上海201204) 摘要 分子伴侣热休克蛋白90(Hsp90)对于许多涉及细胞周期调控、信号转导以及细胞生长调控蛋白质的折叠、成熟及稳定 是必需的 Hsp90 的N 端结构高度保守，包含一个ATP 结合口袋并具有ATP 酶活性，Hsp90 的功能依赖于ATP 与Hsp90 结 合后诱导的构象重排及之后的ATP 水解 为了深入研究ATP 与Hsp90 结合后N 端的结构及其功能状态，使用 滴法共结晶 了Hsp90 的N 端与ATP 类似物AMPPNP 及ATP S 的复合物，并利用分子置换法对其结构进行了解析 两个复合物晶体 结构都捕获到了核苷酸的电子密度，尤其是 - 磷酸的电子密度，从而观察到 - 磷酸与蛋白质之间的相互作用 ATP S N - 磷酸的捕获证实了之前报道的结构 没有捕获到 - 磷酸是其处于无序状态而非被水解 单体状态下的人源Hsp90 - AMPPNP 与处于二聚体化的酵母Hsp90-AMPPNP 结构对比可见S1 和ATP lid 的位置有明显区别，结构分析表明，E18-K100 和N40-D 127 之间形成的氢键相互作用，在一定程度上阻碍了S1 和ATP lid 的摆动，很可能阻止了二聚体的形成 N 关键词 Hsp90 ，AMPPNP ，ATP S， - 磷酸，相互作用，调控 学科分类号 Q71 DOI: 10.3724/SP.J.1206.20 11.006 11 热休克蛋白90(Hsp90)是细胞中重要而丰富的 N 端对ATP 的水解，ATP 与Hsp90 结合后引发 蛋白质，在真核细胞 表达量可达总蛋白质含量的 Hsp90 的构象变化，这些构象变化导致Hsp90 表面 1%，当细胞受到外界压力刺激时，其表达水平会 疏水性的改变，使底物蛋白质与Hsp90 亲和力增 [1] 进一步提高 Hsp90 的主要功能是作为分子伴侣， 加并与Hsp90 结合，然后ATP lid 发生翻转，关闭 负责帮助多种底物蛋白正确折叠，100 多种底物蛋 核苷酸结合口袋，N 端与M 端相对运动并形成N 白的成熟及稳定需要Hsp90 发挥作用，其底物蛋 端的二聚体化，同时水解 心形成，在此过程 白多与细胞生长及扩增相关[2-3] 在细胞质中，人 Hsp90 帮助底物蛋白质正确折叠 ATP 水解为 源 Hsp90 主要包括 2 个异构体：Hsp90琢 和 ADP 后， - 磷酸释放，Hsp90 转变为更紧密的构 Hsp90茁，它们分别由不同的基因编码，具有高度 象，折叠成熟的底物蛋白质与Hsp90 的亲和力下 的序列同源性 2 个异构体具有不同的功能， 降，从分子伴侣释放，Hsp90 完成功能的执行 Hsp90茁 在许多组织中是组成型的表达，而Hsp90琢 Hsp90 与腺苷结合的不同构象可以调节Hsp90 与底 是各种细胞在应激条件下诱导型表达[4-5] 物蛋白质以及共同分子伴侣的亲和力，控制着整个 Hsp90 包括3 个高度保守的结构域，C 端主要 分子伴侣复合体功能执行的进程[9-12] 负责同源二聚体的形成；M 端含有大量疏水表面， 与底物蛋白质的结合及其折叠相关；N 端含有一个 * 国家重点基础研究