家蝇幼虫体内一种抗菌蛋白的分离纯化.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００７，２７（９）：７４～８０ 家蝇幼虫体内一种抗菌蛋白的分离纯化 １，２ ２ ２ ２ ２ 渠　晖 　郝友进 　荆迎军 　李德森 　杜荣骞 （１南开大学生命科学平台　天津　３０００７１　２南开大学生命科学学院　天津　３０００７１） 摘要　３０％ＨＯ诱导家蝇幼虫９０分钟，继续饲喂２４小时后利用硫酸铵分级盐析、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ２５ ? ２ ２ 和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ７５两步凝胶过滤、ＣＭＳｅｐｈａｒｏｓｅＦａｓｔＦｌｏｗ弱阳离子交换的纯化方法，得到一种电泳 ? ? 纯的抗菌蛋白，经过 ＶＤＳ凝胶扫描得到其分子量为２８ｋＤａ，命名为ＡＰ。抑菌活性分析表明， ２８ ＡＰ对实验中涉及的大多数革兰氏阳性菌和阴性菌都有明显的抑制作用。 ２８ 关键词　蛋白质分离　家蝇　抗菌蛋白 中图分类号　Ｑ８１９ 　　昆虫在自然界中占有着重要的地位，这与它们的 一系列抗菌活性物质进入血淋巴，杀死外来细菌。这 ［１，２］ 活体防御机能密不可分 （图１）。 些抗菌肽合成类似于免疫应答反应和哺乳动物急性期 ［１０］ 　　昆虫细胞免疫包括血细胞对病原体的吞噬作用 反应。它们一般在４～６ｈ后开始出现活力 。例如， （ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ），结节形成（ｎｏｄｕｌｅｆｏｒｍａｔｉｏｎ）和包被作用 活性物质的抗菌活性在柞蚕蛹体内可以持续不断地增 ［３～６］ （ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ） 。昆虫的体液免疫也称非细胞免 加并维持达７天左右，达到高峰以后迅速下降，与此同 ［１１］ 疫，主要包括抗菌肽的诱导表达、溶菌酶的抗菌作用和 时在血淋巴中大约有１０多种免疫蛋白出现 。再如， 酚氧化酶原的活化及其参与的防御反应和伤口愈合。 果蝇（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ）可产生至少７种抗菌肽。 昆虫抗菌肽作为体液防御因子之一，在昆虫免疫应答反 这些抗菌肽主要由脂肪体合成并释放到血淋巴中发挥 应中起着至关重要的作用。它们分子量低、热稳定性强、 作用。表１中列举了一些诱导昆虫产生抗菌肽的主要 具有强碱性且抗菌谱广，备受昆虫学界和生物学界重视。 的诱导源与诱导方法。 基于它们序列和结构特征，昆虫抗菌肽大致被分为４类： 　　目前，国内外从分子水平上研究家蝇的免疫防御 天蚕素（ｃｅｃｒｏｐｉｎｓ）类抗菌肽，防卫素（ｄｅｆｅｎｓｉｎｓ）类抗菌 系统还仅限于有限的报道，而且从家蝇体内分离纯化 肽，富含脯氨酸（Ｐｒｏ）残基的抗菌肽，樗蚕素（ａｔｔａｃｉｎｓ）类 得到的抗菌肽也并不多见，研究方法也各不相同。如 ［７～９］ ［１２］ 以及富含甘氨酸（Ｇｌｙ）残基的抗菌肽 。 陆婕等 以家蝇干蝇蛆为原料，利用加热 层析法和海 ? 　　由于外源性诱导物的作用，昆虫感染病菌或体壁 藻酸吸附法２种工艺提取蝇蛆抗菌肽。本研究工作通 受到损伤后，能诱导血细胞和脂肪体迅速产生并释放