烟草Nt-syr1基因实时荧光定量PCR检测方法,.pdf

20 中国烟草科学 2008 ，29 （3 ）：20-24 ，28 烟草 Nt-syr1 基因实时荧光定量 PCR 检测方法 1,2 1 1 3 4 3 1,5 2 代晓燕 ，苏以荣 *，魏文学 ，陈风雷 ，邹 焱 ，龙 文 ，贾志红 ，范业宽 （1.中国科学院亚热带农业生态研究所亚热带农业生态重点实验室，长沙 410125 ；2.华中农业大学资源与环境学院，武汉 430070 ；3.贵州省铜仁地区烟草公司，贵州 铜仁 554300 ；4.贵州省烟草科学研究所，贵阳 550003 ；5.长沙卷烟厂技术中心， 长沙 410007 ） 摘 要：根据烟草Nt-syr1 基因mRNA 序列设计特异引物，建立了SYBR Green I 实时荧光定量PCR 反应体系，对烟株打 顶后叶片Nt-syr1 基因进行了mRNA 转录水平上的定量分析，为从分子生物学水平上研究烤烟钾素营养调控机理提供新的技 术手段。该方法简单实用，获得的荧光定量PCR 扩增曲线基线平整，指数区扩增明显，斜率大；稳定性和重现性好，变异 系数小；循环阈值Ct 与PCR 起始模板量的对数值之间存在良好的线性关系。对基因表达结果分析表明，烟株打顶后1 h， Nt-syr1 基因在叶片中强烈表达，表达量约是同期不打顶处理的480 倍，随后逐渐降低。与打顶处理相比，打顶后涂抹生长 调节剂可以降低其表达量。 关键词：实时荧光定量PCR；烟草；Nt-syr1 ；基因表达 中图分类号：TS411 文献标识码：A 文章编号：1007-5119 （2008 ）03-0020-06 A Real-time Fluorescent Quantitative PCR for Detecting Transcripts of Nt-syr1 Gene in Tobacco 1,2 1 1 3 4 DAI Xiaoyan , SU Yirong , WEI Wenxue , CHEN Fenglei , ZOU Yan , LONG Wen3, JIA Zhihong1,5, FAN Yekuan2 (1. The Key Laboratory of Subtropical Agro-ecology, Institute of Subtropical Agriculture, CAS, Changsha 410125, China; 2. College of Resource and Environment, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070, China; 3. Tongren Tobacco Company, Tongren Guizhou 554300, China; 4. Guizhou Tobacco Research Institute, Guiyang 550003, China; 5. Technical Center of Changsha Cigarette Factory, Changsha 410007, China ） Abstract: The project aimed to establish real-time fluorescent quantitative PCR detecting Nt-syr1 gene in tobacco and provided a new techniqu