重组鸡α干扰素%2f白细胞介素-2复合蛋白体内抗传染性法氏囊病病毒作用研究.pdfVIP

禽的传染病 重组鸡干扰素/ 白细胞介素-2 复合蛋白体内抗传染性法氏囊病病 毒作用研究* 1 1 2,3 1 1 2 2 吴志明 ，闫若潜 ，程俊贞 ，赵明军 ，刘梅芬 ，杨晓璐 ，张书阳 （1．河南省动物疫病预防控制中心，河南郑州，450008 ；2. 河南科技大学动物科技学院，河南洛阳，471003 ； 3. 许 昌市动物疫病预防控制中心，河南许昌，461000 ） 摘 要 为了研究基因工程重组鸡干扰素/ 白细胞介素-2 复合蛋白（rChIFN--Linker-ChIL-2，重组复合蛋白）在 SPF 鸡体内的抗病毒作用，本研究将 120 只 21 日龄SPF 鸡随机平均分为 4 组，于 21 日龄时进行攻毒和重组复合蛋白注 射，以进行重组复合蛋白在鸡体内抗传染性法氏囊病病毒（IBDV ）作用实验。分别通过临床观察实验和检测4 组鸡在 攻毒前 1d （0 DPC）和攻毒后（DPC ）不同天泄殖腔的排毒率、外周血中持续带毒时间、IBDV 在不同组织器官的动态 分布、血清中 IBDV 抗体水平、外周血中鸡 IFN-α 、IL-2 、IFN-γ、IL-4 和 IL-6 （ChIFN-α，ChIL-2，ChIFN-γ，ChIL-4 和 ChIL-6）的表达水平、外周血 T 淋巴细胞（PBLC ）和脾脏淋巴细胞增殖活性等指标以揭示重组复合蛋白的抗病毒 和免疫增强作用机理。结果表明：与 IBDV 攻毒对照组（第 2 组）相比，重组复合蛋白与 IBDV 同时应用组（第4 组） 鸡的发病率、死亡率和典型症状维持时间显著降低，且第 4 组鸡的排毒率、外周血持续带毒时间和不同组织器管带毒 时间均显著低于第2 组。攻毒后7d～42d （7～42 DPC ），第4 组鸡的IBDV ELISA 抗体水平极显著低于第2 组（P0.01 ）。 3～35 DPC，第 4 组鸡血清中 ChIFN-α、ChIFN-γ 和 ChIL-2、ChIL-6 的表达水平极显著高于其他 3 组对照组 （p ＜0.01）， ChIL-4 表达水平于 3～21 DPC 期间极显著高于其他 3 组对照鸡（p ＜0.01）。第4 组鸡的 PBLC 增殖活性于 7～21 DPC 期间、脾淋巴细胞增殖活性于 7～14 DPC 期间均极显著高于第 2 组（p ＜0.01）。结果表明：重组复合蛋白在机体内对 IBDV 具有显著抑制作用；重组复合蛋白可通过上调机体细胞因子的表达水平、增强鸡体 PBLC 和脾淋巴细胞增殖活 性等方式增强机体的细胞免疫能力，从而发挥抗病毒作用和免疫增强作用。 关键词 重组鸡干扰素/ 白细胞介素-2 复合蛋白；传染性法氏囊病病毒；抗病毒；免疫增强；机理 鸡的病毒性疾病对养鸡业危害严重，目前尚无特效药物可以有效防治，因此研发广谱、高效、安 全、无毒副作用的基因工程抗病毒药物对防治当前严重危害养鸡业健康发展的病毒性疫病具有重要意 [1] 义。α 干扰素（interferon-α ，IFN-α ）具有广谱的抗病毒、抗肿瘤和免疫激活功能活性 ，其主要作用 是抑制病毒繁殖，抗肿瘤活性作用、增强 NK 细胞杀伤病毒感染细胞的能力从而抑制病毒的增殖和扩 散，增强机体细胞免疫应答水等[2] 。目前人用基因工程重组α-干扰素制剂已作为抗病毒制剂而广泛应 用于临床[2] 。白细胞介素-2 （interleukin-2 ，IL-2 ）可促进T、B 淋巴细胞的分化与增殖，促进细胞毒性 T 淋巴细胞（CTL ）、NK 细胞等杀伤细胞的分化，增强其效应功能，诱导这些细胞分泌 IFN-γ、IFN-α 等细胞因子；提高机体的细胞和体液免疫应答水平；还可增强巨噬细胞对抗原的递呈能力、杀菌力及 细胞毒性，发挥抗病毒和抗肿瘤作用[3] 。将IFN-α 和 IL-2 联合应用可发挥协同抗病毒活性。 闫若潜等已成功构建并表达了重组鸡干扰素/ 白细胞介素-2 嵌合基因，得到了 rChIFN-α-Linker- ChIL-2 复合蛋白（重组复合蛋白）并对其在体外、鸡胚内和鸡体内的生物学活