泰山梧桐花多糖对免疫抑制小鼠免疫增强作用的研究.pdfVIP

其他论文 泰山梧桐花多糖对免疫抑制小鼠免疫增强作用的研究 赵雪，王尊民，朱瑞良*，郭繁霞，吴村，曲亭和，潘德芹，黄璇，李奕芙 （山东农业大学动物科技学院，山东省动物生物技术与疫病防治重点实验室，山东泰安，271018 ） 摘 要 采用环磷酰胺注射的方法建立小鼠免疫抑制模型，通过水提醇沉法提取泰山梧桐花多糖，将不同剂量的泰山 梧桐花多糖加入到新城疫活疫苗中，制备成含泰山梧桐花多糖的新城疫弱毒苗，免疫健康小鼠和免疫抑制小鼠，来研 究泰山梧桐花多糖对小鼠免疫增强作用及其对免疫抑制小鼠的免疫恢复作用。结果显示，泰山梧桐花多糖能提高正常 小鼠和免疫抑制小鼠的抗体水平、淋巴细胞比率、淋巴细胞数及血液淋巴细胞转化率，其中200μg·ml-1 剂量的免疫增 强效果显著、400μg·ml-1 剂量组（Ⅳ组）可在第3d 解除环磷酰胺（CTX）导致的免疫抑制，由此说明泰山梧桐花多糖 对小鼠具有免疫增强功能和免疫佐剂功能。本研究将为泰山梧桐花多糖开发成为免疫增强剂和免疫佐剂提供理论依据。 关键词 泰山梧桐花多糖（TPTFPS）；小鼠；免疫抑制；新城疫弱毒苗；免疫佐剂；免疫增强功能 近年来我国畜禽养殖业有了长足的发展，但动物传染病，尤其是病毒类疫病却给国内养殖业带来 了巨大的经济损失。目前，对动物疫病的控制主要依靠接种疫苗和药物治疗，由于近些年畜禽免疫抑 制病的广泛流行，常常导致疫苗免疫失败，即使养殖场严格执行了免疫程序，但某些重要传染病仍然 很难得到控制[1]；在治疗方面，也没有有效的无毒副作用的抗病毒药物。因此，开发研制新型的免疫 增强剂和疫苗佐剂势在必行，也是提高机体免疫力和疫苗效果的有效途径之一[2]。过去广泛应用的佐 剂，如白油等，经常会造成局部非细菌性炎症反应和组织损伤。新型植物来源免疫增强剂和免疫佐剂 的研发是近年来佐剂研究的重要方向之一，许多植物多糖已被证明具有免疫增强作用，魏凯[3]等研究 证明泰山松花粉多糖对兔瘟组织灭活苗具有免疫增强作用；孙振红[4]等研究证明芦荟多糖对禽波氏 杆菌灭活苗具有免疫增强作用；姜俊兵[5]等研究证明黄芪多糖能增强鸡感染传染性法氏囊时红细胞 的免疫功能；马霞等研究表明硫酸化多糖对鸡新城疫疫苗具有免疫增强作用[6]；赖朝阳等人研究证明 灵芝生物大分子多糖 F3 除了可增加调节血液中 T、B 细胞外，还可以增强 Th1 和 Th2 应答[7]。多糖 是由多个单糖缩合、失水而成的大分子物质，具有高度复杂的结构和种属特异性，研究证明多糖具有 免疫调节、抗肿瘤、抗粘附、抗氧化、降低血糖的功效[8]，由于植物多糖材料来源广泛、价格低廉、 功效明显，近年来已逐渐成为研究的热点。 基于以上研究背景，本课题组多年开展了泰山梧桐花多糖对动物免疫功能影响的研究。梧桐花， 又名龙船花，为马鞭草科植物臭梧桐的花，在中国的种植面积正不断扩大。据《本草纲目拾遗》记载 其具有祛风、降压、止痢之功效，有较高的药用价值。近几年梧桐花的研究主要集中在对其成分的提 取和分析，而对其生物学功能特别是免疫增强功能的研究较少。本试验以研究泰山梧桐花及其有效成 分的免疫增强功能为目的，采用水提醇沉法对梧桐花中水溶性多糖进行提取，研究其对小鼠的免疫增 强功能和免疫佐剂功能，期望为泰山梧桐花多糖开发成为免疫增强剂和免疫佐剂提供理论依据。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 试剂 HRP 标记的兔抗鸡二抗，购自晶美生物工程有限公司；胎牛血清，郑州佰安生物工程有限公司产 品，批号 200511003 ；梧桐花采自泰山山区四月份盛开的鲜花；新城疫疫苗购自法国 SPA；RPMI164 0 培养液，Gibco 公司产品；DMEM 细胞培养液，Gibco 公司产品；胰蛋白酶，Amresco 公司产品；伴 刀豆素球蛋白（ConA ），Amresco 公司产品，用无血清 RPMI 1640 培养液配制成 0.025 mg/ml ，过滤 除菌，分装，-20 ℃保存；PI 染料，Amresco 公司产品；淋巴细胞分离液，购自北京赛驰生物科技有 限公司；二甲基亚砜（DMSO ），分析纯，购自天津凯通化学试剂有限公司；噻唑蓝（MTT ），Sigma 公司产品；环磷酰胺（CTX ），Sigma 公司产品。 1.1.2 仪器设备 流式细胞仪，Guaga EasyCyte mini ，Guava Technologies 公司；Gene5 酶标仪，ELX800 美国 Bi o-Tek 宝特公司；二氧化碳培养箱，Therm