合作小型猪T细胞受体α链的基因结构及其多样性研究.pdfVIP

合作小型猪T细胞受体Q链的基因结构及其多样性研究 高建iI￡1,2,3李玩生‘，曾爽1，虏永祥‘，景忐忠”·2 (1．中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学困家重点实验室，农业部兽I廷公共I!生重点实验室，|I．肃兰州 730046；2．II．肃农业人学；3．中农威特生物科技股份有限公jd) 摘要：以公开的人类、小鼠和猪TCRⅡ链基因为参考序列，用RT—PcR法从健康的合作小型猪外刷JnL、淋巴结和脾脏的 淋巴细胞中克隆了93个猪TCR Q基阂(简称STA)。测序分析表明，克隆的猪TCRⅡ链的皋闲都含有可变的信号肽区和v区、 高变的J区和恒定的C区的基冈片段，但Je皋闪序列问的核廿酸组成都刁i完伞相同，．凡具有。I+分复杂的多态性和多样性，皋 TCR 冈问的I耐源性在68．4％～98．7％，这J．jQ链的某奉綦因结构特征栩一致。I司时依据TCRa皋因的同源性进行丫遗传演化关 oV 丫结构分析，神!各个区域发现丫一些变异集中点和变异热点区。用IMGT／V—QUEST软件的分析方法，将合作小型猪TCR 区(STAV)、J区(STAJ)基因片段与人类的进行相似性比较和归类分析，发现合作小型猜TCRd与人类的遗传演化关系较近， 合作小型猪在健康状态具有应对外界复杂微生物等环境的TCR多样性分子遗传基础，．日．适合作为人类免疫学及疾病研究动物 模型。 关键词：小型猪：TCRⅡ基因：生物信息学：多样性： 由于猪的解剖学和生理学与人极为相似，除刚于兽医学研究之外，已广泛刚于人类的生理学、生物学 及特有疾病的研究。但由于普通猪的体型过人，并不利丁其微生物控制和实验操作，所以小型猪的培育及 虑川成为国内外的研究方向。合作猪是我国青藏高原地I又：珍贵的地方品种种质资源，它与目前各种已开发 的实验用小型猪相比具有体型矮小，体重轻，适应高原环境、抗逆性强等特性，若按照实验动物学标准定 向培育，可培育山我国实验心独特的近交SPF小型猪，满足医学对特种实验动物的要求。因此，我所-I：2003 年从甘肃甘南藏族臼治州引进合作猪进行近交培育，目前初步培育成功了3个家系的小型猪品系。由rJj小 型猪的遗传特性特别是免疫遗传学特征对其在医学、兽医学上应川关系密切，我们重点开展了其T细胞受 获得性免疫相关的关键分：f，以明确其遗传特征和稳定性，为其基础和应州研究提供依据。 T细胞是一类介导细胞免疫和调：if，1+免疫应答的关键免疫活性细胞，其细胞表面有多种不同的标志，其 中TCR作为一种细胞表面受体在获得性免疫功能中发挥着非常重要的作川。多数TCR是由Q、B肽链组成 Q B可特异地识别由抗原递早细胞(APC)表面MHCI类 的异二聚体即TCRaB。在病原抗原识别上，TCR 或MHC IX， II类分子早递的抗原肽，从而启动获得性免疫反应。TCR基冈具有人量的V区和一些D区以及J 在重排的过科中，不同的组合以及结合过程中核苛酸的插入(N区)等可以构成人量的识别不同抗原的TCR 库。 在20世纪80年代，TCR的研究人多集中在小鼠和人类，随着对免疫学研究的不断深入，研究人员发现 家卣如猪、牛和羊与小鼠和人类的免疫系统有明显的差异。鉴丁．此，本研究以GenBank上登载的小鼠利人 类以及猪的T细胞受体基冈为参考序列，川RT—PCR法从猪的外周血、肠系膜淋巴结和脾脏的淋巴细胞中克 Q链的基冈结构和多样性特征，为猪病的预 隆TCRQ链基因，并进行生物学信息学分析，以明确合作猪TCR 防与控制以及作为动物模型在人类生命科学上的研究与虑川提供理论依据。 1．材料与方法 基金项Il：甘肃省技术研究‘j”发々项(1207TCYA025)和国家‘I+二：K“863”课题(201IAAl0A211) 作者简介：高建甲(1985～)，硕：I：研究生一l：要从事生物技术产品研究b71：3“T作 1．1材料 kit、Triz