土壤中生防菌粉红粘帚霉6721的荧光定量PCR检测方法.pdfVIP

( ) 25 1 35 - 40 　　　　　　　中国生物防治 　Chinese Journal of Biological Control 　　　　　　　2009 年 2 月 土壤中生防菌粉红粘帚霉 671 的荧光 定量 PCR 检测方法 陶 萌 , 李世东 , 张拥华 ( 中国农业科学院植物保护研究所/ 植物病虫害生物学国家重点实验室 , 北京 100081) 摘要 : 为了建立重要植病生防真菌粉红粘帚霉 671 菌株的荧光定量 PCR 检测方法 ,收集了目 标菌株 、粘帚霉属其它多个种及近缘木霉属的多个种等共 18 个菌株 ,并进行了 ITS 区测序 。 以200bp 左右差异较大区段设计出探针和引物 。该引物及探针能有效扩增 目标菌株 ,而其它 17 株非 目标菌株没有扩增 ,表明所设计的引物和探针具有高度特异性 。以目标菌株的阳性克 ( ) 隆质粒作为标准物质 ,建立了标准曲线 ,相关系数为 09989 ,且扩增效率较高 950 % 。经过 土壤样品试验 ,得出标准 曲线相关系数为 09979 ,表明所建立的粘帚霉 671 菌株荧光定量 PCR 检测方法合理有效 、快速实用 ,适合生态学研究的要求 。 关 　键 　词 : 粉红粘帚霉 ; 土壤 ; 快速检测 ; 荧光定量 PCR ( ) 中图分类号 : S4768 　　文献标识码 : A 　　文章编号 : 2009 Development of Realtime PCR Quantitative Assay for Rapid Detection of Gliocladium roseum 671 , an Effective Biocontrol Agent , in Soil TAO Meng , L I Shidong , ZHAN G Yonghua ( State Key Laboratory for Biology of Plant Diseases and Insect Pests , Institute of Plant Protection , CAAS , Beijing 100081 , China) Abstract : Gliocladium roseum 671 selected by the authors has been demonstrated to be a highly effective biocontrol agent of the diseases caused by Sclerotinia sclerotiorum and Rhizocotonia solani . A rapid and accurate quantification of the agent is urgently needed for understanding its interaction with disease pathogens in soil and improving its effectiveness for disease management . Primers and probes for quantifi cation in soil by realtime PCR were designed from ITS regions of the fungi belo