牧草DNA基因多态性研究与在草业中的应用.pdfVIP

牧草DNA基因多态性研究与在草业中的应用 张新跃 四川省草原工作总站 四川，成都610041 系统介绍了分子生物学研究DNA基因多态性原理、方法，对基因多态性分析技术在草业科学中的 研究内容，研究方向和今后的应用问题提出了看法和建议。 基因多态性；草业中的应用；DNA 第五篇专题研究 一。⑥人类对生物的选择(选育)是利用多态性变化，选择一致性内容，以达到为我所用的目标。 2 DNA基因多态性分析 2．1基因鉴定 基因理论创立后，人们一直都在不断探索基因与表达的关系，并试图按照人类的需要将某种基因从一 种生物重新组装到另一种生物上，创造出新的生物，这就诞生了“基因工程”或称“遗传工程”。人类要 想改变世界，必先了解世界。基因的状态如何?这就为我们提出了基冈多态性分析的基本要求。随着基 因工程的发展和品种鉴定的需要，目的基因和品种的遗传基础，都需要通过基因的分析来确定，基因的多 cllain 态性分析应运而生。在基因工程研究中，聚合酶链反应(Polymeras (molecular clolving)，DNA测序(DNA 基因的多态性分析到重组子的鉴定分析，转移后的目标基因是不在阳性克隆中出现，从基因测序，再到人类 基因组草图的完成，经历了几十年，很多基因鉴定方法被发明。遗传基【大I鉴定方法很多，不同的方法用于不 同的目的。在草业科学研究中，目前还没有转基因牧草新品种提交审定，研究内容多数是围绕育种材料和 品种鉴定进行。 2．2草业科学中常用的多态性分析方法 2．2．1核酸的凝胶电泳凝胶电泳的基本原理是在硷性条件下(PH8．0～8．3)，核酸分子带负电荷，在电场 中向着与其电荷相反的电极方向移动。凝胶是支持电泳介质，它具有分子筛效益。移动的速度可凶电离子 的大小、形态和电荷量的不同而有差异。利用不同的凝胶和移动速度的差异，就可以区别各种大小不同的 分子。因而，凝胶电泳可用于分离、鉴定和纯化DNA片段。常用的两种凝胶为琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝 白质分子量进行电泳分离，它适用于低于相对分子质量蛋白质(低于100)，寡聚核苷酸的分离和DNA序列 分析。该电泳具备分离只差1个核苷酸的不NDNA片段的特性，是DNA序列分析因素中的关键技术。 2．2．2 7端加入合适核苷酸 过程——即在DNA聚合酶的作用下，以变性单链为模板，依据碱基互补原理，在引物的3 分子，不断延伸直至完成新的DNA的合成。新合成的DNA分子也可以作为模板，参与后续的扩增反应，使目的 分子呈指数增长。因此，变性、退火和延伸循环反复25--30次后，即可以从少量的模板DNA中扩增出大量的 目的产物。通过对扩增引物设计，扩增产物的电泳，可用于分析设计目的基因片段。 2．2．3蛋白质指纹图谱技术由于不同植物材料遗传基础物质DNA不同，形成的模板RNA也有差异，使合成的 蛋白质或酮工酶等生化物特性表现出差异，应用生化技术以电泳图谱的形成将材料之间的这些差异显现出 来，就可以鉴别不同的材料。这种电泳图谱的多态性一定程度上反映JDNA的多态性。这种电泳图谱多态 性丰富，具有高度的个体差异性和稳定性，就像人的指纹一样，因而被称为“指纹图谱”。蛋白质指纹图谱 技术主要包括酮工酶电泳、蛋白质电泳、高效液相色谱和抗体反应等技术，其中酮工酶和蛋白质电泳最经 565 四川省畜牧兽医学会2012年学术年会 基因表达的直接产物，生物进化及发育过程中形成的DNA序列上的差异可反映在酮工酶谱上。由此构成酮 工酶的种属专一性，在不同的种及品种问具有丰富的变异类型，可用于构建品种的指纹图谱，用于农作物和 果树的品种鉴定。常用的酶有酯酶和过氧化物酶。电泳采用聚丙烯酰胺凝胶等。种子贮藏蛋白的电泳可 用于品种鉴别，已在小麦、大麦、玉米、水稻和豌豆等许多作物上得到应用。应用较多的是醇溶蛋白(禾 谷类)和球蛋白(豆类)，所用电泳技术包括聚丙稀酰胺凝胶电泳、淀粉胶电泳等电聚焦电泳等。 2．2．4D