琼脂糖凝胶电泳常见问题分析.docVIP

琼脂糖凝胶电泳常见问题分析 问题 可能原因 解决方法 DNA Marker降解 核酸酶污染 每次吸取时更换灭菌枪头，勿将电泳缓冲液带入管中；用后密闭4°C保存 保存不当 4°C 或-20°C保存，避免多次反复冻融；不可加热 DNA Marker无法正确分离 琼脂糖质量差 使用质量可靠的琼脂糖制胶 电泳缓冲液多次使用后失效 更换缓冲液 条带黯淡 核酸浓度过低 增加上样量 核酸降解 使用不含核酸酶的试剂和耗材制备样品 DNA条带被示踪染料掩盖 提高上样量；避免使用与目的片段迁移率相同的示踪染料 条带模糊或弥散 电泳缓冲液多次使用后失效 更换缓冲液 核酸部分降解 使用不含核酸酶的试剂和耗材制备样品 核酸样品纯度差，含有DNA结合蛋白或高浓度的盐份 酚/仿抽提或乙醇沉淀去除蛋白、盐份等杂质 电压过低，电泳时间过长 根据凝胶大小和电泳缓冲液类型，使用适当的电压进行电泳 染色时间过长或拍照前放置过久，DNA条带弥散 电泳结束后及时观察、拍照 条带缺失 DNA条带分子量过大 使用脉冲凝胶电泳 分子量接近的DNA条带没有分开 选择适当的凝胶浓度进行电泳 电泳缓冲液使用不当 SD和TBE缓冲液适于分析较小分子量的DNA片段，大片段分子不能完全分离；TAE缓冲液不适于分离很小的DNA片段 电泳时间过长或电压过高，DNA走出凝胶 缩短电泳时间，调整电