喹烯酮致HepG2细胞DNA损伤效应的研究.pdfVIP

中国环境诱变刺学会第14届学术交流会议论文集 【摘要l目的建立氡染毒小鼠肺损伤模型，观察不同剂量组在不同时间段小鼠肺部细胞凋亡情况，分析 氡与p53通路上各基因的相关性。方法将小鼠随机分为染毒组(染毒30WLM和60WLM)和正常对照组， 各剂量组小鼠分别饲养0天、1个月、3个月后猝死取肺。染毒在SR-NIM02型氡室内进行，采用RAD7 连续监测仪和FD一125型氡钍测量仪监测氡室内氡浓度，对照组氡浓度为80Bq／m3，染毒浓度为0．02WLM， 其他处理条件对照组小鼠与染毒组小鼠完全相同；采用TUNEL法检测小鼠肺组织细胞凋亡程度；采用免 法检测p53基凶的突变情况；RNA水平上，采用实时荧光定量PCR法观察氡染毒不同剂量、不同时间段 各组mRNA表达差异。结果TUNEL法检测结果显示，在0天、1个月、3个月处理后，与正常对照组相 比，氡染毒60WLM组小鼠肺细胞凋亡指数均明显增加(P(o．05)；免疫组化结果显示，氡染毒30WLM组 与正常对照组相比p53蛋白表达明显增加坼O．05)，60WLM组p53蛋白和bax蛋白表达与正常对照组相 理后p53基因未发现突变情况；实时荧光定量PCR法检测结果表明，各时间段不同剂量组与正常对照组相 比均有上升趋势。结论氡染毒可使小鼠肺损伤，出现肺细胞凋亡，p53通路可能参与了肺细胞的凋亡调节。 I关键词l氡；肺损伤；细胞凋亡；p53：bcl．2；bax 喹烯酮致HepG2细胞DNA损伤效应的研究 靳溪I陈倩，邹家杰，陈开跑，张婷，刘风英，汤树生，肖希龙’ (中国农业大学动物医学院，北京，100193) 【摘要】目的：喹烯酮(Quinoeetone)是一种新型喹嗯啉类药物，我国于2003年8月正式批准其作为 动物抗菌促生长剂在动物饲料中添加使用。截至目前，关于喹烯酮是否具有遗传毒性尚未有定论。本研究 的DNA损伤进行检测，为评价药物的遗传毒性提供科学依据，完善喹烯酮药物的使用安全评价。方法： 距(”m)和尾部DNA含量(％)参数指标与药物剂量呈剂量依赖性正相关且具有差异显著性(pO．05)。RAPD 分析图谱显示条带出现或缺失以及条带亮度改变，表明喹烯酮诱导HepG2细胞基因组DNA损伤。喹烯酮 致HepG2细胞nDNA和mtDNA出现剂量依赖性损伤，相对扩增比例与药物剂量呈负相关，损伤频率和药 物剂量呈正相关，相同剂量组mtDNA的损伤频率高于nDAN，此结果说明喹烯酮诱导的mtDNA损伤较 nDNA损伤更为严重。结论：研究表明喹烯酮是诱导HepG2细胞DNA损伤阳性物，应谨慎作为动物饲料 添加剂使用。 【关键词】喹烯酮；DNA损伤；HepG2细胞；彗星实验；RAPD分析；L0ng—PCR 喹烯酮(Quinocetone)是一种新型喹嚼啉类药物(图1)，对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌等 具有抑菌作用。同时，喹烯酮可促进食品动物生长以及提高饲料转化率【1，2】我国于2003年8月正式发布公 告批准其作为动物抗菌促牛长剂在动物饲料中添加使用p1。研究表明，同属于喹嗯啉类药物的卡巴氧和喹 乙醇具有致突变和潜在致癌性【锚】，并且，喹烯酮与卡巴氧和喹乙醇具有相同的母核结构，鉴于此，喹烯酮 药物的使用安全同益受到霞视。 125 中国环境诱变荆学会第14届学术变流会议论文集 图l喹烯酮结构式 目前，关于喹烯酮是否具有遗传毒性尚未有定论。4,g骨髓微核实验，染色体畸变分析及psPl89穿梭 质粒突变检测实验结果均为阴性【9，10]。Ames实验．hgpn基因位点突变实验和以Ve∞细胞为研究对象的彗 星实验结果均显示喹烯酮具有遗传毒性效应[4．9，ll】。 本研究旨在应用人肝癌细胞系HepG2细胞，通过彗星实验，RAPD分析以及Long．PcR方法对喹烯酮药 物诱导的DNA损伤进行检测，为评价药物的遗传毒性提供科学依据，完善喹烯酮药物的使用安全评价。 1．材料与方法 1．1细胞及试剂 U／ml的青霉素和100 HepG2细胞由首都师范大学王卓博士后惠赠，DMEM培养液加10％胎牛血清及100 m