硒锌铅对细胞端粒和端粒酶的作用及机理研究.pdf

摘 要 硒和锌是人体必需微量元素 硒具有重要的生物功能 如抑制肿瘤 降低重金 属毒性和抗氧化等作用 锌参与 DNA 复制 RNA 转录和细胞的各种生理活动 影响细胞的增殖与分化 增强机体免疫力及抗氧化作用 铅是一种有害的微量元 素 对人体神经系统 消化系统和免疫系统有不同程度的损伤作用 是“人类可能 的致癌因子” 与肺癌 胃癌和脑癌的发生密切相关 但是关于硒 锌和铅与细胞 端粒酶活性和端粒长度的研究目前未见报导 本文以人胎肝细胞L-02 和人肝癌细胞SMMC-7721 为模型 采用噻唑蓝 MTT 比色法和细胞形态观察法获得作用于细胞的硒和锌的最佳浓度以及铅的浓度 通 过端粒重复序列扩增 焦磷酸根酶联发光技术 TRAP-ELIDA 检测端粒酶活性 逆转录-聚合酶链式反应 RT-PCR 法检测人端粒酶逆转录酶 hTERT 基因表达 水平 流式荧光原位杂交法 FLOW-FISH 检测端粒长度 并测定了细胞内丙二 醛 MDA 含量 巯基含量 谷胱甘肽过氧化物酶 GPx 活性和总的超氧化物 歧化酶 T-SOD 活性 研究硒 锌和铅对细胞端粒酶活性 端粒长度的作用以 及与细胞氧化还原水平的关系 结果如下 1 硒对细胞氧化还原水平 端粒酶活性和端粒长度的作用 实验表明能与L-02 和SMMC-7721 细胞作用达到3 4 周的硒浓度范围在0 2.5 mol/L 之间 在此浓 度范围的硒能够显著性降低L-02 细胞内MDA 含量 增加巯基含量和提高GPx 活 性 从而增强了细胞的抗氧化能力 对于SMMC-7721 细胞 补充该浓度范围的硒 对于细胞内MDA 含量 巯基含量均没有显著性的改变 说明该浓度范围的硒不能 显著性改变 SMMC-7721 细胞的氧化还原状态 有关端粒酶活性 hTERT 基因表 达水平和端粒长度的实验结果表明 上述浓度的硒可以显著性增加L-02 细胞端粒 酶活性 提高hTERT 基因表达水平和增加细胞端粒长度 而对于SMMC-7721 细 胞 该浓度的硒对于细胞的端粒酶活性 hTERT 基因表达水平和端粒长度均无显 著影响 说明人胎肝细胞L-02 比人肝癌细胞SMMC-7721 对细胞氧化还原水平的 改变更敏感 硒在2.5 mol/L 以下浓度范围内能增强人胎肝细胞L-02 的抗氧化能 力 延长其寿命 而同样浓度范围的硒对人肝癌细胞SMMC-7721 的作用却不明显 2 锌对细胞氧化还原水平以及端粒长度的作用 能与两类细胞作用都达到3 4 周的硫酸锌浓度范围为0 80 mol/L 该浓度范围的锌能够显著性降低L-02 细 胞内MDA 含量 增加细胞巯基含量和T-SOD 活性 从而增强了细胞的抗氧化能 I 力 对于SMMC-7721 细胞 同样浓度范围的锌对细胞MDA 含量 巯基含量以及 T-SOD 活性均无显著性改变 说明该浓度范围的锌对 SMMC-7721 细胞的氧化还 原水平无显著性作用 有关端粒长度的研究表明 80 mol/L 锌能维持 L-02 细胞 端粒长度, 同时加速SMMC-7721 细胞端粒长度的缩短 这说明锌可以增强人胎肝 细胞L-02 的抗氧化能力 维持细胞寿命 是细胞所必需的微量元素 3 铅对细胞氧化还原水平以及端粒长度的作用 能与两类细胞作用达到3 4 周的乙酸铅浓度范围为 0 100 mol/L 该浓度的铅能够显著性升高 L-02 细胞 MDA 含量 降低巯基含量 从而降低细胞的抗氧化能力 对于SMMC-7721 细胞 该浓度的铅对于细胞内MDA 含量 巯基含量均没有明显的改变 说明该浓度的铅 不能显著性改变细胞的氧化还原水平 有关细胞端粒长度的研究表明 与对照组 相比 50 mol/L 的铅能缩短L-02 细胞的端粒长度 而显著性延长SMMC-7721 细 胞端粒长度 该结果暗示铅能降低人胎肝细胞L-02 的寿命 这与铅致细胞氧化作