中国仓鼠肺细胞双份染色体及其DNA分子的交换重组.pdfVIP

遗 传 学报， 11(2);125-131,1984 ActaGeneticaSinica 中国仓鼠肺细胞双份染色体 及其DNA分子的交换重组，‘ 黄 裕 泉 江（苏教育学院，南京） 艾菲的咔琳 (aphidicolin 能抑制真核生物细胞核内的a一多聚酶，同时还能诱导中国仓 鼠细胞核内DNA分子的内复制，由此形成的双份染色体经5-浪脱氧尿普(BrdU标记，单股 BrdU替换的染色单体总是位于双份染色体的内侧，而双股B]rdU替换的染色单体总是位于双 份染色体的外侧。DNA分子在内复制的过程中，经交换重组，表现在双份染色体上为姐妹染 色单体内的交换和非姐妹染色单体间的交换。双份染色体中的斗条染色单体在有丝分裂中前 期，从三维空间构型变为平面构型时，在引力和张力的相互作用下，致使染色单体在交换处发 生扭曲，成形染色单体间的交叉，从而使有直接亲缘关系的染色单体仍成对联系在一起呈规则 分布状态。 DNA分子在真核生物细胞核内的内复制，用放射性同位素标记法或用5-澳脱氧尿 昔 (BrdU）标记法所形成的双份染色体 d（iplochromosome)，由单股 BrdU替换的染色 单体总是位于双份染色体的内侧，而由双股BrdU替换的染色单体总是位于双份染色体 的外侧C1［,一“o]‘。若有姐妹染色单体的交换，则情况有所例外s1〔7又双份染色体处于有丝分裂 前期末时，上述染色单体的规则分布状况则发生变化71‘oaphidicolin能抑制真核生物细 胞核内a一多聚酶2,〔5,61，并能显著地增加中国仓鼠体细胞核内姐妹染色单体的交换频率(1［1] 同时还能诱导中国仓鼠体细胞核内DNA分子的内复制e（ndoreduplication)[s.2，即DNA分 子连续复制两次后细胞才进人有丝分裂。DNA分子在两次复制过程中，姐妹DNA分子 内和非姐妹DNA分子间的交换重组，反映在染色体的水平上，即表现为姐妹染色单体内 和非姐妹染色单体间的交换重组以及它们相应的染色单体扭曲类型 （图版 1,2--6箭头 所示），扭曲的结果仍恢复原先有亲缘关系的分布状态，即单股 BrdU替换的染色单体 深（ 色），由于交换到外侧位置，通过扭曲仍居于双份染色体的内侧，而双股 BrdU替换的染色 单体 浅（色），由于交换到内侧位置，通过扭曲仍居于双份染色体的外侧。这是由于有亲缘 关系的染色单体间的引力和染色体制备过程中作用于染色单体上的张力，在双份染色体 从三维空间构型变为平面构型时，作用于不同染色单体和同一染色单体的不同部位上产 生的应变结果 见（图2)a 材 料 和 方 法 中国仓鼠肺细胞V79，培养在5%0胎牛血清的Eagle：培养液中，培养瓶底面积为 本文于 1983年3月3日收到。 1）本文承蒙G.E.Trosko博士、C.C.Chang博士、J.V.Higgins博士、M.S.5zasaki博士以及刘祖洞、 邵启全两位先生提出宝贵的修改意见，在此一并致谢。本文中有关实验是在美国密执安川立大学儿科和人类 发育系体细胞遗传研究室学习时完成的匕 126 遗 传 学 报 31卷 25Cmz，细胞数为 1.2X101,培养在370C5拓的COz培养箱中。BrdU的浓度为15zjM, aphidicolin的浓度为 OpM,0.2fzM,0.4pM，分别培养24小时、36小时和48小时，待 其细胞在上述培养液中分别完成两个细胞周期，用常规胰酶法收集细胞。接着用0.075M 氯化钾低渗液在室温下处理细胞6分钟，离心8分钟 （1O00rpm)。将收集的细胞用3:1 甲醇冰醋酸固定液固定3次，用冰水片制片，在60℃热板上干燥，于室温下待其样品老化 一天，然后在 51zg/ml的Hoechst33258SorensenspH6.8缓冲液中染色I，分钟。将片子 在重蒸馏水中洗一次，滴数滴 Sorensens,pH8缓冲液于载玻片的标本上，盖上盖玻片，然 后置于UV灯下照射 15分钟，载玻片温度为400+C。接着在 SorensenspH8缓冲液中除去 盖玻片，并在重蒸馏水中淌一次，