中国仓鼠核仁形成区的活性在仓鼠-小鼠杂交细胞中受抑制.pdfVIP

遗 传 学 报， 10(6):483-488,1983 ActaCeneticaSinica 中国仓鼠核仁形成区的活性在仓鼠一 小鼠杂交细胞中受抑制” 颜永衫 钱 进 习霞辉 （中国科学院遗传研究所，北京） 用Polyethyleneglycol(PEG）将中国仓鼠骨髓细胞与小鼠细胞株PG19细胞融合，获得杂 交细胞克隆。染色体C一带分析表明，早在细胞繁殖的第4代，杂交细胞就迅速地丢失了17条 仓鼠染色体。在杂交细胞中，只有9.4％的仓鼠核仁形成区 N（ORs）有活性，而且所有这些有 活性的NORs都位于仓鼠第3号染色体上，占该号染色体原有NORs总活性的40%，因此我 们的结果不仅首次表明在中国仓鼠一小鼠杂交细胞中，绝大部分 9（0.69o）的仓鼠NOR，活性被 抑制，而且还发现了位于不同染色体上的仓鼠NOR：活性受抑制的程度可有明显的不同，NORs 活性很可能与它们所在的染色体的结构有关。小鼠NORs的活性在杂交细胞中没有受到明显 的影响。 近几年来，通过微细胞、小分离细胞、分离的中期染色体、提纯的DNA、细胞质体、游 离的细胞核或整个细胞，把遗传物质导人到受体细胞里的研究已取得了很大的进展。然 而，并不是所有导人的基因组（）都能按它们原来的规律行使复制、转录和翻译功能的。因 此，在同一细胞里，不同来源的遗传物质在基因表达过程中的相互影响是目前体细胞遗传 研究中一个引人注目的问题。 Hsu等61〔和 Elsevie：等31〔(1975）用原位分子杂交方法证明了用银染法可以选择性 地显示出18S和28S核糖体 RNA (rRNA）基因在染色体上的位置，即NORs。同时， Goodpastur。等 ，〔‘和后来的Schmid等14〔1(1982）和Zakharov等 （1982)5，都认为根据 Ag-NORs的数目可以估计NORs的活性。 关于在亲缘关系很远的人一小鼠杂交细胞中 亲本NORs活性的研究已有少数的报道[2,9]，而在亲缘关系较近的仓鼠和小鼠杂交细胞中 双亲NORs的活性又如何是值得探讨的问题。本文报道通过中国仓鼠骨髓细胞与小鼠细 胞株 PG19细胞杂交，来研究仓鼠和小鼠NORs活性的变化，至今尚未见有这方面的报 道。 材 料 与 方 法 一（）材料 分别取中国仓鼠的骨髓、肾和肌肉等组织，剪碎后用0.25% 胰酶消 J化 骨（髓除外）4-6小时 4（0C）或10分钟 3（70C)。将细胞接种在含15多小牛血清的 TC199培养基里 3（70C)，让细胞繁殖3-5代，供染色体制片用。用于细胞融合的骨髓 本文于 1982年12月17日收到。 1)肖桂芳、金锋同志参加部分工作，宋加林同志提供仓鼠，特此致谢。 呼84 遗 传 学 报 10卷 细胞是直接取自于中国仓鼠骨髓的新鲜组织。 PG19细胞 H（GPRT-）是牛津大学 H.Harris教授赠送的。 二（）细胞融合 将约106个 PG19细胞和106个仓鼠骨髓细胞混合在一起，用基 础 Eagle培养基洗涤细胞2次。往细胞里加人 2ml预热 3（70C）的50%PEG，在370C 培育2分钟，再用含15务小牛血清的1640培养基洗融合细胞，将细胞分散在6个培养瓶 里。在370C培养24小时后将培养基换为选择性培养基 HAT飞 三（）染色体分析 1．染色体的制片 用细胞对数生长期，往培养基里加入秋水仙素 最（终浓度为0.2 pg/ml),3-4小时后用0.25 胰酶处理使细胞从培养瓶表面脱落。脱落的细胞经离心 沉淀后用0.075MKCl 低渗处理 3（70C,8分钟），最后用甲醇一冰醋酸 3（:1)固定3次， 用常规空气干燥法制片。 2．染色体的C一带技术 片子经 0.2NHCl处理1小时 室（温），水洗，待干燥后用 饱和的Bo(OH)：处理1分钟 6（0Cc)，再用无离子水洗。然后将片子放在 2XSSC(600C) 培育3-4小时，经水洗、干燥后用10多Giems。液染色。每组观察40-73个分散良好、 C一带清晰的中期细胞。 （四）核仁形成