中国人LDR152_PstI RFLPs及其在一个强直性肌营养不良症(DM)家系中的连锁分析.pdfVIP

遗 传学 报， !8(1);6--11,1991 ActaGeneticaSinica 中国人LDR152/PstlRFLPs及其在一 个强直性肌营养不良症 D（ ）家系中 的连锁分析＊ 谭 骏． 邱信芳 薛京伦 刘祖洞 （复旦大学遗传学研究所，上海200433) 李焰生 宰春和 第（二军医大学长征医院，＿匕海） 强直性肌茸养不良症是一种常染色体显性遗传病，临床上以发病晚、症状表现多样为特 征。本研究应用19号染色体上与DM基因紧密连锁的单拷贝片段 LDR152(D19S19）在中 国上海地区人群 6（1例）及1个DM家系中进行 RFLP(RestrictionFragmentLengthPoly.. morphism）的连锁分析，结果表明：(1)等位片段19kb和 llkb在人群中的分布频率分别为 43.44%a和56..56%，其中lgkb纯合子为22.95%,llkb纯合子为36.070o,19kb和llkb杂 合子为40.98%，此结果与国外报道的明显不同。(2）在我们所分析的这例DM家系中，发现 DM基因与19kb等位片段相连锁，并呈孟德尔式遗传。进而，对两例无任何临床症状的DM 基因携带者作出了明确的基因诊断，并对家系中患DM的危险成员进行了DM的风险估计。 笑键词 限制性片段长度多态性，强直性肌营养不良症，连锁分析,D19S19 强直性肌营养不良症 D（ystrophiamyotonica,DM）是 1种常染色体显性遗传病， 发病率为2-5X10-51110临床上常以进行性肌无力，肌强直及白内障为特征，并伴有心 肌病、生殖腺萎缩、额秃以及智力低下等。由于本病发病较晚平（均25岁）[1]，因此常把致 病基因遗传给下一代。发病后严重者将丧失劳动能力，目前对此病尚无有效治疗措施，因 此对该病的基因诊断，特别是产前诊断有着极其重要的意义。 由于DM基因尚未克隆成功，因此DM基因的分析只能利用RFLP的间接法测定。 自从1983年 Davies报道用蛋白多态性连锁分析 以及补体C3基因作为遗传标记进 行 RFLP分析，把DM基因定位于19号染色体上以后m，分离与DM基因紧密连锁并可 提供RFLP分析的单拷贝DNA片段一直吸引着各国学者，其中最有诊断价值的是 LDR152(D19S19)DNA片段，该片段定位在 19cen-19g1.3E430 DM病例在我国已有不少报道，至1986年底共报道100多例LIJ，而国内的DM基因 诊断工作尚未开展，本项研究的目的是探讨用 LDR152探针在中国人群中进行DM基 本文于1989年 5月3q收到。 ＊本项研究获国家遗传工程重点实验室部分资助以及上海市科学技术发展基金 （878631004)资助。 1)第三军医大学医学遗传学研究室。 1期 谭 骏等：中国人 I.DR152/PstIRFLPs及其在一个强直性肌营养不良症 (DM）家系中的连锁分析 7 因诊断的应用价值。 材 料 与 方 法 一（）分析对象 (1)正常人抗凝脐带血标本61份，来自上海市国际妇幼儿童保健院；(2）一个DM家 系各成员抗凝外周血标本 15份，其中DM患者2份，来自上海市上海县。 二（）LDR152(D19S19)探针 美国R.J.Bartllet博士和A.Roses教授赠 送，此探针 （1.68kb）是以HindIII限制性内切酶酶切位点构建在SP64载体上[4]［0 三（）墓因组DNA提取、限制性内切酶消化、电泳以及印迹杂交 按本研究室常 规抽取脐带血白细胞基因组DNA，每一样本5pgDNAPstl酶切过夜 l（tlgDNA/5,uPstI), 电泳 （1.0-1.5V/cm)24小时。凝胶拍照后，按经典方法叨将凝胶中DNA转移至硝酸纤 维膜上，置膜于800C2小时，尔后进行分子杂交4（20C,50务甲酸胺和标准盐浓度）16-24