中国人苯丙氨酸羟化酶基因的一个新的切接位点突变的鉴定.pdfVIP

遗传 HEREDITAS(Beijing)20(5):31～331998 中国人苯丙氨酸径化酶基因的一个新的 切接位点突变的鉴定① 马继红② 黄尚志 王 玫 李 辉 罗会元 中（国医学科学院基础医学研究所遗传室 北京 100005) 摘 要 本文鉴定了苯丙氨酸经化酶基因355位密码子上的一个新的错义突变Q355H，此突变导致谷氨 酞胺变成了组氨酸。此突变位点恰位于外显子10和内含子11的交界处，因此将引起mRNA形成过程中 的剪接错误而产生异常的mRNA,Q355H的鉴定为一例苯丙酮尿症胎儿的产前诊断提供了理论依据． 关键词 苯丙酮尿症，苯丙氨酸经化酶，切接位点，突变 中图分类号 Q39 IdentificationofaNovelMutationSplicingSite inPhenylalanineHydroxylaseGeneinChinese MAJihong HUANGShangzhiWANGMeiLIHuiLUOHuiyuan (DepartmentofMedicalGenetics,InstituteofBasicMedicalSciences,ChineseAcademy ofMedicalSciences,SchoolofBasicMedicine,PekingUnionMedicalCollege,Beijing100005) AbstractAnovelmissensemutationatcode355Ofphenylalaninehydroxlasegenewasidentified,thismu- tationcausedthesubstitutionofGin355forHis355.Themutantsitewasattheboundaryofexon10and intro11andmightcausesplicingerrorsduringRNAprocessing,WhichcouldresultinabnormalmRNA. IdentificationofQ355HprovidedatheorticevidenceforprenataldiagnosisofafetuswithPKU KeywordsPhenylketonuria,Phenylalaninehydroxylase,Splicingsite,Mutation 苯丙酮尿症p（henylketonuria,PKU）是由于肝脏中苯丙氨酸经化酶(phenylalaninehydroxylase,PAH）缺陷而 引起的常染色体隐性遗传病。1983年，Wo。等首先克隆了人类的PAH基因 n〔,PAN基因定位于 12822-12822.4，长约90kb，含13个外显子和12个内含子。随着基因诊断技术的飞跃发展，人们发现PKU患者 的PAH酶缺陷主要是由于PAH基因的点突变所致 ”〔．目前，世界上已经发现100多种PAH基因的点突变，而 在我国仅鉴定出20多种，为了进一步鉴定更多的点突变类型，从而实现PKU的产前基因诊断，我们对PAH基因 的外显子10进行了检测。 1材 料 与 方 法 1.1标本来源及模板DNA的制备 PKU患儿及其父母外周血及母亲再孕羊水标本由北京协和医院遗传咨询门诊提供，经饱和盐析法制备血及羊 水脱落细胞的基因组DNA. ①本课题由国家85攻关项目基金8（5-918-06-03）资助． ②现工作单位：天津市儿童医院儿科研究所病毒室，天津 300074, 32 遗 传HEREDITAS(Beijing)1998 20卷 1.2PCR扩增PAH基因的外显子 10 PCR引物序列为5-CCCAGTCAAGGCACATA-3，和3-TAACAACTTTGGGATAAACA-5,扩增的总 体积为50川，0.5ug基因组DNA,dATP,dGTP,dCTP,dTTP各2.5mmo1/L由（华美公司提供）。引物各为 250ng,5川的lox缓冲液。95℃变性5分钟，冷却至5oC，加2U的DNA聚合酶遗（传所提供）。以后每一循 环为95℃变性30秒，退火温度为53C，退火时间为30秒，72℃延伸