中国人红细胞磷酸葡萄糖变位酶的电泳分型及其频率研究.pdfVIP

遗传 HEREDITAS(Beijing) 7(5):41-421985 人红细胞酸性磷酸醋酶和醋酶D琼脂糖凝胶电泳法 孙志贤 姜国芝 党进军 （军事医学科学院放射医学研究所，北京） 红细胞酸性磷酸醋酶 (EAP）和醋酶 为 1.5-2毫米的玻璃板。取 13X16X0.3厘米 D(EsD）在遗传上是两种重要的多态性酶类1］〔0 大小的有机玻璃模框、用铁夹子固定在玻璃板 研究表明，对于中国人群来说，这两种同工酶类 上。 有着较高的个体识Oil能力 d（iscriminatingpower, 称取340毫克琼脂糖 上（海东海制药厂或 简称DP值），其中EAP的DP值为0.51,EsD 北京红星生化制品厂生产），加34毫升凝胶缓 的DP值为0.61E2.31。在为骨髓移植提供遗传标 冲液 (（1:5稀释EAP电极缓冲液或1:5稀释 记证明习‘、群体遗传学、法医学等研究中，是经 EsD电极缓冲液）于三角瓶内。置加热磁力搅拌 常被选用的同土酶。它的遗传表型测定方法有 器搅拌加热至90℃左右使琼脂糖完全溶解，然 Hopkison163最初采用的淀粉凝胶电泳法，Gru- 后浇铸于有机玻璃框内成型。对于EAP同工酶 nbaum1s]报道过的醋酸纤维素膜电泳法，以及so- 分型，无需制作样品槽，室温下固化30分钟，即 rensen[9，和Koster[7)等人选用的琼脂糖凝胶电泳 成 1外(W/V)琼脂糖凝胶板。EsD同工酶分 法。这些方法中，淀粉凝胶电泳法分辨力虽好， 型，则需在琼脂糖固化之前距阴极端4厘米处 但费时且繁琐。醋酸纤维素膜电泳分型方法简 制做长 13X高1.5X宽1毫米的样品槽，固化 单、快速，然而采用国产醋酸纤维素膜的分离效 后即可应用。但新鲜血样可不必做样品槽。 果总不理想。为此，我们参照Rodamlbl方法，应 （四）点样 EAP同工酶型分析时，用待 用国产琼脂糖，建立了 EsD的高压琼脂糖电泳 测红细胞解离液饱和 12X2.5毫米大小的新华 分析方法。同时还设计了EAP同工酶的琼脂 滤纸条，横向排列在距离负极端4厘米处琼脂 糖凝胶电泳法，所获酶谱清晰，分型准确，较 糖凝胶表面，令其自行扩散至胶内，30分钟后 Sorensen的方法I9]更满意。现将具体方法介绍 去掉滤纸条，留下红细胞解离液血迹。 如下。 EsD同工酶分析时，以微量注射器将10微 升红细胞解离液加至样品槽内。新鲜血样上样 材 料 与 方 法 方法亦可与EAP同工酶分型方法相同。 一（）红细胞解离液 按常规方法制备 五（）电泳 在有冷却板的水平式电泳 压积红细胞，加等体积双蒸馏水溶破，经冻融处 槽内进行。本实验用 pharmaciaFBE-3000平 理后即可使用。 板电泳装置。先将琼脂糖胶玻璃板横放在冷却 二（）电极缓冲液 0.018M柠檬酸钠－ 板上，用两层滤纸 一（层新华滤纸和一层49号 0.0294M 磷酸二氢钠一0.0012M 乙二胺四乙酸 滤纸）在琼脂糖胶板两端与电极缓冲液槽间搭 二钠，pH6.0，此缓冲液用于EAP测定；0.062M 桥。 Tris-0.0165M 柠檬酸一0.018M 硼酸一0.00165M 电源选用稳流稳压电源或三恒电源。EAP 氢氧化锉spH7.5，此缓冲液用于EsD测定。 选用的电场强度为 12伏／厘米，循环水冷温度 （三）琼脂糖凝胶板制备 将可调水平 SunZhixian etal.:AgaroseGelElectrophoresisof the 板调平，上面放置一块20X15厘米大小、厚度 HumanRedCellAcidPhosphataseandEsteraseD ．斗1 ． 10-120c-，伏特小时数为800-900或2.5小时 获得的酶谱清晰，分型准确。较之Sorense