正常人与A-T患者培养细胞对致癌物与诱变剂反应的初步观察.pdfVIP

要焦．竺EREDITAS(Beijing)13(5):25-261991 正常人与A-T患者培养细胞对致癌物 与诱变剂反应的初步观察” 章 静 波 董 敏 蒋 惠 君 （中国医学科学院基础医学研究所，北京 100730)华（西医科大学公卫学院，成都，610041) 采用原位缺口翻译法 I（nsitunicktranslationmethod)，比较T正常人与毛细血管扩张性共济失 调 a（taxiatelangiectasia,A-T)患者培养细胞对强致癌物及弱诱变剂的反应。发现两种细胞对甲基 硝基亚硝基孤 (MNNG）的反应相同，但在低浓度的没食子酸 (gallicacid,GA）作用下，A-T细胞 显示出明显的DNA损伤，而正常细胞未见改变，对此意义以及该技术方法进行了简要讨论。 关键词：原位缺口翻译，毛细血管扩张性共济失调，致癌物，诱变剂 毛细血管扩张性共济失调 A（-T）是一种遗 基亚硝基孤 (MNNG）或诱变剂没食子酸 传性综合征，患者体细胞易于发生 自发性的 (GA),, DNA损伤。它们对放射线、致癌物及诱变剂 二（）致癌物与诱变剂的处理 的敏感性升高，因此患者发生肿瘤的风险要比 所用致癌物为MNNG，诱变剂为GA。先 正常人高出100倍左右 ，〔‘’］，本研究意在用近年 以二甲基亚矾 (DMSO）助溶，然后以不含血 来建立起来的原位缺口翻译技术(3［,4,6，进一步在 清的DME溶液稀释成终浓度为 10-3,10-2 分子水平上比较正常人与A-T患者细胞对致 mol/L加人细胞内。对照组不含药物，只含等 癌物与诱变剂的反应，以探讨A-T患者易于发 量的 DMSO。药物处理时间为4小时。 生肿瘤的分子机理，同时也籍此对该技术方法 三（）原位缺口翻译技术 进行评估。 以Carnoy液固定上述经MNNG或 GA 处理的细胞及对照组。于每张盖片 约（1.8X1.8 材 料 与 方 法 cm）滴上30川缺口翻译混合液，其组成为：50 mmol/LTris-HC1(pH7.5)，5mmol/LMg- （一）细胞系及其培养 C1,,10mmol/L2-琉基乙醇，200u/mlE.Coli 正常人细胞系及 A-T细胞系皆从美国 DNA聚合酶I(BoehringerMannheimGmbH, ATCC购得。前者为代号5757成纤维细胞系， F.R.C),dATP,dGTP和 dTTP(Sigma) 细胞较纤细，生长缓慢；后者为代号2052成纤 各30mmol/L，以及 0.3,zmol/L 3H-dTTP 维细胞系，细胞较前者略粗短，生长也更缓慢。 (42Ci/mmol)o 15分钟之后，以50mmol/L 本实验皆用20代以内的细胞。 为进行原位缺 Tris-HCI(pH7.劝 轻洗数次以终止反应，继 Q翻译，将它们传代至预先放置有盖片 2（.2X 2.2cm）的培养碟内 D（:3.4cm)，每碟加入 Zhanglingboetal.:ComparisonoftheResponse 2ml含10务胎牛血清 G（IBCO,USA)，适量 toCarcinogenorMutagenbetweenNormalandA-T