正常状态和搞病毒状态的HeLa细胞翻译小鼠干扰素mRNA能力的比较.pdfVIP

遗传学报 8(3);233-240,.1981 AetaCeneticaSinica 正常状态和抗病毒状态的HeLa细胞 翻译小鼠干扰素mRNA能力的比较 朱立煌 胡乃璧 梁志国 （中国科学院遗传研究所，北京） 从NDV病毒诱导的Lpa细胞中分离的小鼠干扰素mRNA能在完整的HeL：细胞中翻 译，而且翻译时小鼠干扰素在 HeLa细胞中的生产有较好的重复性，平均产量为72单位／毫 升。然而在用人的干扰素处理 HeLa细胞后，处在抗病毒状态的HeLa细胞就不能再翻译小 鼠的干扰素mRNA。这一现象可能与干扰素的抗病毒机制有关。 干扰素的诱生和干扰素的作用分别隶属于两个不同的基因表达系统，前者的信使 干（ 扰素mRNA）可以通过它的抗病毒作用进行测定。由于干扰素的抗病毒活性很高，干扰 素mRNA在各种无细胞和完整细胞系统中的翻译都已获得成功7-〔9,12,20--25,281，尽管使用的 mRNA依然处在相当不纯的状态。用完整体细胞进行翻译，通常效率较低。Green等人12〔1 用改进的氯化钙技术显著地提高了翻译的稳定性和效率。他们用叙利亚田鼠胚胎细胞作 为翻译系统，用于翻译的人干扰素 mRNA实际上是从诱导后的细胞 (FS-4）中提取的细 胞质 RNA,翻译后培养液中干扰素效价最高为·76单位／毫升。现在我们用人的HeLa细 胞翻译小鼠Lpa细胞的千扰素mRNA，小鼠干扰素的效价能达到81单位／毫升，且有较 好的重复性。 HeL。细胞作为小鼠干扰素mRNA的受体有二个优点。第一，人的成纤维细胞干扰 素对小鼠细胞有相当严格的种属差异6,〔14,201，其次，HeLa细胞对于人干扰素的作用比较 敏感，容易建立起抗病毒状态，而干扰素的处理显然能启动新的基因表达2,〔12,16]。因此，我 们进一步比较了处在正常状态和抗病毒状态的HeLa细胞对异源细胞干扰素 mRNA的 翻译能力，结果发现，处在抗病毒状态的HeLa细胞丧失了这种能力，这是一个很有意义 的现象。 材 料 和 方 法 （一）材料 1．细胞 小鼠Lpa细胞和 L929B （以下简称 L929)细胞均引自中国医学科学院病 毒研究所。人 HeLa细胞为英国 Bristol株，由中国医学科学院抗菌素研究所赠送。人胚 本文于1980年8月5日收到。 中国医学科学院病毒研究所侯云德、昊淑华、李玉英和张智清等同志，在实验材料上提供大量的帮助，并对 我们的工作提出宝贵的意见，在此一并致谢。 234 遗 传 学 报 8卷 肺二倍体细胞 2BS株，引自北京生物制品研究所。 前三种细胞的生长培养基均为含10%小牛血清的 Eagle基木培养液。 人胚肺细胞 生长在含10外小牛血清和30务水解乳蛋白的Eagle培养液中。维持培养液含2务的小 牛血清。 2．病毒 新城鸡瘟病毒 N（DV B株）和滤泡性口腔炎病毒 V（SVIndiana株）引自 中国医学科学院病毒研究所。NDV病毒在鸡胚原代细胞中传代。 3．人白细胞干扰素 效价为2X10单‘位／毫升。 由中国医学科学院病毒研究所 赠。 4．小鼠干扰素国际参照样品 由美国国立卫生研究院提供。批号G002-904-511o 5.PolyI-PolyC 聚肌昔酸 ·聚胞营酸复合物） 美国PL公司产品。 由美国 H.B.Levy博士赠送。 6.酶 蛋白酶 ProteinaseK系西德Merck公司产品；核糖核酸酶 (ribonuclease）系 英国 KoonlightLaboratories出品。 二（）方法 1．干扰素及其 mRNA的诱导 Lpa细胞在表面积为10X20cm，的大方瓶中培养 (370C)。当细胞生长至汇合时，换维持培养液，继续培养至24小时 3（70C)，然后用约600 血凝单位／毫升的 NDV病毒液覆盖细胞表面，37℃培养I小时后倾去病毒液，并用 pH 7.2的磷酸缓冲液 P（BS)洗细胞两次，最后加入维持培养液在37℃继续培养，以提取 mRNA和收获干扰素。 2.RNA的提取 按照Lebleutl8l的方法，提取L