玉米黑粉菌mtDNA的研究Ⅱ.限制性内切酶酶切图谱.pdfVIP

遗传学报，IS （，）：4754800.1941 盛etaCeneticaSinsca 玉米黑粉菌mtDN 的研究 IL限制性内切酶酶切图谱 冯国宏 程 文，）陆师义 （中国科学院微生物所，北京100080) 本文报道玉米黑粉菌mtDNA 的限制性内切酶酶切图谱。分别将 mtDNA的Bamlil 各片段制成探针，与 mtDNA分别用8种酶酶切后的 Southern膜进行杂交，用片段重叠法 得出各套片段的排列次序，再将克隆化的BamHI片段进行第二酶切，按分子量拼排出各酶 酶切位点在 ，tDNA上分布的图谱。此外，片段重叠分析时，还发现玉米黑粉菌mtDNA为 环状结构；杂交分析时还发现mtDNA内没有明显的重复序列。DNA总长。U.7kbo 关键词 限floml谱，mtDNA,玉米黑粉菌 ’真菌mtDNA的研究已积累了不少资料，但其来源主要在于对子囊菌的研究，如啤 酒酵母 S（accharomycescerevisiae户61、曲霉 A（spergill1,S)115,221链抱霉 (Neurospo- ro)C5,17,243、柄抱壳菌 (Podospora)、抱腔菌 (CochliobolUS)E9.301、头抱霉菌 (Ceptaato- sporiurn)tai、以及其它酵母菌I2.4.0.141等等。然而对真菌中较为高等的担子菌；目前资料仍 相当有限，除了在鬼伞 C（oprinus)rQ81，双抱菇 (Agaroicusbrunnescens)03、和牛肝菌 (SuillusY3例有限制酶谱和基因图谱外，其它担子菌mtDNA 的研究还仅限于有关其 大小，变异范围等初步分析t2ro,2210 玉米黑粉菌属担子菌，侵染玉米植株后产生瘤组织，并在此完成其有性生长的生活 史。在人工培养基上，它可类似酵母，以单倍体单核细胞进行无限度的出芽生长，形成酵 母状菌落。改变培养基成分，它也可在培养基上进行有性生长。因此，l.1y是担子菌中进行 遗传学研究的良好材料L1.21。目前玉米黑粉菌与大肠杆菌之间的穿梭载沐已经建成②,27]，玉 米黑粉菌的交配型基因，以及这个菌侵染植株过程中起重要作用的一个侵染基因都已被 克隆[8,13.161。这些工作大大深化了对这个菌的分子遗f专学研究。我们则对其 mtDNA进 行了研究，已克隆了约90多的DNA序列，鉴定出了7个基因1,〔71。本文报道其限制性内 切酶酶切图谱。 材 料 和 方 法 玉米黑粉菌 (Ustilagomaydis)B6菌株用于提取 mtDNA, 用于制备探针的 mtDNA片段，除B2和B3以外，其余都是首先克隆到pBR322上， 然后从质粒上切下 夹的，B2,B3和 B9ab。则是直接从酶切后的mtDNA 中分离的。 本文于1989年4月14日收到。 1）中国科学院遗传研究所。 476 遗 传 学 Is卷 mtDNA片段的分离按低融点 agarose法[19［]进行。 本文所用的其它方法，如质粒提取，mtDNA分离纯化，探针制备，DNA杂交等，均 见另文n3c［ 实 验 结 果 一（）mtDNA酶切片段及其大小 用8种限制性内切酶：BamHI,HindIII,AvaI,PstI,Bgl11,EcoRI,SaII, XhcI对 mtDNA进行完全酶切，各酶都切出多个片段，其电泳照片见图1。各片段 大小见表 10 mtDNA 的总长度为60.71 0。2kbo 二（）各套酶切片段中片段的排列顺序 将 mtDNA 用酶切并电泳