在继代培养中玉米花粉愈伤组织无性系的核酸和蛋白质变化.pdfVIP

遗 传 学报， 14(2):114-120,1987 ActaGenetica Sinica 在继代培养中玉米花粉愈伤组织无性系的 核酸和蛋白质变化 黄大年1)谷明光 张雪琴1) （中国科学院遗传研究所，北京） 郭彩月 曹孜义 （甘肃农业大学，武威） 本实验室筛选出具有不同分化能力的单倍体玉米无性系组织，挑选其大小相同、新鲜的、 具有分化能力的无性系No.1和完全丧失分化能力的无性系No.250组织，转接到分化和继 代两种培养基上，分析其 DNA和 RNA以及蛋白质含量的差异，以了解组织在分化过程中 DNA,RNA和蛋白质动态。试验结果表明，在分化和继代两种培养基上，No.1的DNA,RNA 和蛋白质含量都高于No-250;No.1和No.250在分化培养基上DNA和RNA含量增加的速度 比在继代培养基上要快；在组织分化过程中，No.工会出现一些新的小分子量蛋白质分子， 而No.250中却没有，这些特殊的蛋白质分子可能与组织分化有关。 关键词：继代培养；玉米花粉愈伤组织无性系；DN弋 RNA;蛋白质 高等植物的细胞分化是一个非常复杂的过程，植物细胞和组织无性系的建立为研究 植物细胞分化和发育、器官形成提供了有用的实验体系。至今，利用同步培养悬浮细胞体 系和非同步实验体系，研究体细胞胚发生期间染色质组份、大分子合成、多肤代谢和脂肪 代谢的变化，许多研究者普遍地发现胡萝 卜和烟草等悬浮细胞胚发生时染色质模板活性 提高和非组蛋白蛋白质活性增加4,〔51，以及在球状胚形成之前和期间，DNA合成很活跃， RNA和蛋白质含量稳定上升[6［10 本文目的在于探讨来源于同一玉米花粉胚性细胞团。具有不同分化能力的两个愈伤 组织无性系在分化和继代两种不同培养基上一些生化变化，以进一步研究组织分化的内 在因素。 材 料 和 方 法 供试材料选用两个具有不同分化能力的玉米愈伤组织无性系，一为具有分化能力的 No.1，一为丧失分化能力的No.250。它们来源于玉米品种八趟白花药培养诱导产生的 同一块花粉胚性细胞团。这两个无性系在长期继代培养中90务以上的细胞的染色体数 目仍稳定地保持在2，二x一10的水平上11〔；同时，这两个无性系的细胞大小基本一致， 差异不明显，它们的分裂、生长速度都很快，也无差异。 将每块 0.1--0.2rr,。直径大小的 本文于1987年 12月3日收到。 1)现工作单位在杭州中国水稻所。 2期 黄大年等：在继代培养中玉米花粉愈伤组织无性系的核酸和蛋白质变化 113 新鲜细胞团分别接种到固体分化培养基和继代培养基上，由于组织转移后基本上是5天 到一星期时就可观察到胚胎发生，故每隔7天取样，每次取2克鲜重，共取3期。每一样 品重复测定3次，取其平均值。试验重复2次。 继代培养基：MS十2,4-D 1.0毫克／升＋K0.1-0.5毫克／升＋CHX00毫克／升十 蔗糖2多十琼脂0.7务。 分化培养基： 凡 ＋K1.0毫克／升＋6-BA1.0毫克／升＋IAA0.2毫克／升＋肌醇 100毫克／升＋CH500毫克／升十蔗搪6%十活性炭0.5并十琼脂0.7%o 培养温度为23-27-co 继代培养是在弱散射光照下，分化培养是在 1,000一1,500 L.ux光照下进行。 蛋白质粗提取物按 Nagon方法制备[41［。取新鲜组织约2克重，悬于20ml冷的0.01 M Tris-HCI(pH 7.5)-0.001M EDTA缓冲溶液中匀浆，滤液经1$,000xg离心30分 钟 4（0C)，上清液按 Lowry方法12〔1测定可溶性蛋白质含量。 DNA和RNA提取方法是根据Marmur方法加以修改[21［。其程序是将2克鲜重组织 加 15m10.5M NaC-0.1M EDTA(pH7.5）溶液匀浆，过滤液加等体积氯仿一异戊醇(24: 1,V/V)振荡30分钟，然后1o,aooxg离心10分钟 4（0C)，上层水相中加等体积氯仿一异 戊醇，摇匀后 10,000xg离心