在观察蔬菜作物染色体上丙酸-铁-洋红-水合三氯乙醛(PICCH）染色的新技术.pdfVIP

第斗卷 第1期 遗 传 学 报 Vol.4，No.1 1977年 3月 ACTA GENETICA SINICA March, 1977 在观察蔬菜作物染色体上丙酸一铁一洋红一水合三氯乙醛 (PICCH）染色的新技术 河北农业大学总校园艺系选种教研组 在研究植物花粉母细胞减数分裂和染色体变 染，而后用丙酸一铁一洋红一水合三氯乙醛染色的方 异时，对于染色体的动态以及染色体数目的鉴定 法，获得了良好的效果。其方法和步骤如下： 等技术，常常是教学和科研工作上很重要的实际 1．在黄瓜、辣椒和番茄等蔬菜作物花粉母细 问题。为了达到观察染色体的目的，关键则在于 胞正处于细胞分裂的时期’），选择一定大小的花 染色的技术。 蕾，除去花瓣，然后置于95％酒精、氯仿和丙酸 我们知道，在不同的作物中，其细胞内所含的 (6:3:1）的混合液中进行杀死固定。 为了媒染， 物质不仅有所区别，而且含量也各不相同。另外， 其中丙酸是采用 Fe(()H)，的饱和溶液。材料固 不同作物染色体的大小，染色的难易也有差别。 定在室温条件下，经12-24小时或更长一些时间 正因为如此，我们在进行染色体观察时，就必然会 都可。 遇到一定的困难和问题。 制片不是细胞染色不 2．试验材料经固定后，用 95％酒精浸洗数 好，就是染色后看不清染色体。有时甚至用两三 次，随之用PICCH染色液进行涂抹染色。若当时 种染色剂也不易见效。在葫芦科作物中就有这种 不作观察，可将花蕾从95％酒精通过85-75 情况。例如，怀特克等s〔]在葫芦科作物染色体的 的酒精，最后移至 70络 酒精中，并置于冰箱中 研究中指出：葫芦科多数种的染色体，不论是用 （，℃）保存备用。 现代的醋酸洋红或醋酸地衣红染色都不易成功， PICCH染色液配制的方法是：先取0.5％的 即或是用孚尔根染色也未能得到好的反应，至少 丙酸洋红液5毫升，然后加人2克水合三氯乙 南瓜属 (Cucurbito）是这样的。因此，我们必须根 醛，并用玻璃棒搅拌使之充分溶解，最后再滴以 据不同的作物选择不同的染色剂和不同的配制方 Fe(OH)，的饱和丙酸液一至数滴。滴后以不发生 法加以使用。 沉淀为准。配好后即转变成鲜丽的浓玫瑰色，这 植物染色体染色的方法很多，主要的染色剂 时用以染色为好。易染的作物经媒染后，可用不 有醋酸洋红、醋酸地衣红、醋酸间苯二酚蓝、醋酸 加铁的丙酸洋红一水合三氯乙醛染色液 P（ICCH) 苏木精和无色复红等。以上这些染色剂对不同的 染色。如在固定时不采用媒染的方法，则试验材 J作物都有其良好的作用。至于利用丙酸洋红染色 料必须用PICCH染色液才能产生良好的效果。至 的方法则很少应用。根据作者1974年的实验，丙 于0.5％丙酸洋红染色液配制的方法，最好是采 酸洋红染色反应很好，可以列为主要染色剂之一。 用回流冷却的装置来制作。取。．5克洋红加入到 其次是染色剂配制的方法不同，其效果也有很大 小火煮沸的100毫升45％丙酸的溶液中，经3-4 的差别，所以在配制时应特别注意。 小时后取下，使之冷却，然后过滤即成。 在蔬菜许多种类中，如黄瓜、辣椒和番茄等， 3.以上经过清洗的材料，或者是保存的材料， 其染色体很小，而且难以着色。如果染色剂的选 在进行涂抹染色时，可从酒精液中将花蕾取出，然 择或配制不当，就会使细胞质与核分不清楚。这 后用镊子取一花药或一小片花药置于载玻片上， 样，我们对染色体的动态和染色体数也就无法鉴 这时用另一载玻片进行涂抹，使成一薄层，并于其 定。为了探讨一种对蔬菜作物染色体研究上比较 上滴1-2滴PICCH染色液，经数分钟后即可显 有效的染色剂和方法，我们于1974年利用黄瓜、 辣椒、番茄以及容易染色的