在大肠杆菌中具有启动功能的菠菜叶绿体DNA片段的克隆及序列分析1).pdfVIP

遗传 学 报， 18(6);564569,1991 AetaCeneticaSinica 在大肠杆菌中具有启动功能的菠菜叶绿 体DNA片段的克隆及序列分析” 李 伟2） 朱立煌 胡乃璧 （中国科学院遗传研究所，北京 100101) 将经 ，au3A部分酶切过的菠菜叶绿体DNA(ctDNA）克隆到载体pGA46的．BglII位 点，得到了具有启动功能的菠菜 ctDNA片段，对其中的两个片段进行序列分析后观察到有与 原核生物启动区域相符的保守顺序。由此，本文对片段所具有的启动功能的强弱做了说明。 关链词 菠菜叶绿体 DNA：启动子，序列分析 植物的叶绿体 DNA(ctDNA）与核 DNA一起共同为叶绿体蛋白编码，以实现光 合作用等功能。对多种植物叶绿体基因 组研究 （包括烟草 ctDNA）全序列分 ErORI 析川‘后发现，其基因的组织结构及部分 DNA 序列具有原核特征，基因大都以 多顺反子形式共同转录is)，转录启动区 域一般有与原核生物一致的保守序列， 即 一10区的TATAAT （其中前两个 核营酸 TA 和最后一个核昔酸T更为 HindIII PatI 恒定）和 一”区的TTGACA 其（中前 三个 TTG更恒定），大多数叶绿体启 动子能被大肠杆菌的RNA聚合酶识 Fragment1 别￡7，。‘“，，据此特点，可以用克隆原核生物 Fragment2 启动子的方法克隆仆｝一绿体启动子，’以获 取叶绿体遗传操作的元件。 图1载体 pGA46示意图。Tcr基因启动区域被缺 载体 PGA46Ei-6（图1)具多种抗性 失，在缺失区域插入菠菜 ctDNA片段。图1中所 示的两个插入片段1和2长度分别为 。.56kb及 基因，其中四环素抗性基因 (Tc今的启 0.75kb，片段的粗线部分表示核昔酸序列己测。 动区域缺失，在此部位具多种限制酶酶 Fig. 1Circularrestrictionmap ofvector 切位点， 将 ctDNA片段引人此部位， pGA46.Thepromoterregion ofTelgenewas deleted.SpinachctDNAfragmentswereinser- 如果片段有启动功能，四环素抗性得以 tedinthedeletedplace.Twofragmentsare 恢复，由此可获得需要的片段，本研究对 shown in thediagram with the fragments length0。56kband0．75kb.Boardpartswere 用这种方法得到的两个菠菜 ctDNA sequenced. 片段进行核昔酸序列分析的结果是：它 本文于1989年11月，日收到。 n太文对中国科学院遗传所童克忠先生及中国预防医学科学院病毒所金奇先生的