玉米组织同工酶和蛋白质谱带的遗传研究.pdfVIP

遗传．一学 报， 12(2);119-125.1,1985 Acto Cenetica Sinica 玉米组织同工酶和蛋白质谱带的遗传研究 I．过氧化物酶和细胞色素氧化酶同工酶酶谱 曾孟潜 杨太兴 （中国科学院遗传研究所，北京） 本研究共采用110份玉米材料，应用垂直或卧式平板聚丙烯酚胺凝胶电泳分析和双波长 色谱扫描仪扫描方法，对28种组织的过氧化物酶和细胞色素氧化酶同工酶作了组织特异性的 鉴定和遗传分析。结果表明乡两种酶的第4、5酶带是检验美、亚洲 （中国）两大起源地区玉米亲 缘关系的标记酶带，这两条酶带又主要是玉米绿色组织 包（括绿色叶片、叶鞘、苞叶和幼芽等） 所特有的酶带；两种酶的第4,5酶带都是受 1对共显性等位基因所控制。试验结果有助于进 一步研究标记酶带，为标记酶带结构基因的定位打下基础。 以往有些学者在矮牵牛、马铃薯、番茄、胡萝 卜、烟草和玉米等植物中，发现同工酶的 电泳酶带数与相对活性，因植物基因型、组织器官与发育阶段不同而异，有的具有组织 器官特异性、发育阶段特异性，一些种 亚（种）具有标记酶带1-〔6,810矮牵牛、番茄和玉米 中重要的过氧化物酶酶带分别与3个、6个和9个结构基因有关，个别结构基因已经定 位[6,7,14,111。转录后的修饰对许多过氧化物酶酶带的产生可能起作用。 然而，对玉米的同工酶酶带及其调控位点的研究还很不充分，国外只有零星报道E917 国内正在开展这方面的工作。我们试图在以往工作的基础上研究：(1)玉米过氧化物酶 和细胞色素氧化酶同工酶在不同组织中的表现，(2）玉米同工酶酶带调控位点的遗传分 析，以期为研究调控基因的定位打下基础。 材 料 与 方 法 本项研究正式开始前，进行过多次预备试验，采用近百份玉米 Z（eamaysL.）材料， 3份大努草 (EuchlaenamexicanaSchrad.),2份摩擦禾属 T（ripsacumsp.),2份野生型 昔CW,C属 (CoixlachrymajobiL.)., 2份栽培型慧该属 C（oixlachrymajobivar.friumentace- mekina)材料，在不同生育期的不同组织 器（官）中检测7种同工酶 (2种氧化酶类、3种脱 氢酶类和2种水解酶类）。在预备试验的基础上于 1980年开始正式试验至今。正式测定不 同组织的同工酶选用黄早4，罗系3,748788,64040-5550，埃一，塘＋等玉米 自交系及其 杂交组合共16个材料；美洲、亚洲 （中国）两大起源地区玉米同工酶测定，选用94个材料。 材料播种于本所试验场或温室，或在培养皿中发芽。分别在散粉、吐丝期、乳熟期 授（粉后 20天）、种子发芽的幼芽期、6叶期按不同组织 器（官）取样，设2次重复。反复比较和分 本文于1984年1月30收到． 12） 遗 传 学 报 12卷 析绿色组织的一些酶带在杂种 Fx,F2和 BC，的表现，推断其调控位点基因数量与作用 方式。检测的同工酶有2种：过氧化物酶与细胞色素氧化酶。制样、电泳和染色方法、区 带号分析等，均见以往论文1,〔21。取2,000毫克样品，加人 1:2.5(W/V）比例的 0.065M Tris-0.01M柠檬酸 pH8.2缓冲液。在冰浴中制成匀浆后经4层纱布过滤，滤液在 K70D 冰冻离心机中，49C,3,000rpm离心20分钟。取上清液加入 2:1(V/V）比例的10多甘 油后置于一10℃低温冰箱中贮存备用。 加样样品蛋白质浓度一般为 17毫克／毫升。采 用垂直平板聚丙烯酸胺凝胶电泳检验阳极酶带时，分离胶浓度7务，浓缩胶4务，每板20 个加样孔，每孔加样A50微升；每板12个加样孔，加样量80微升／孔，电泳在Tris-Clycine pH 8.3缓冲液、电压 10伏／厘米4℃条件下进行约 14小时。采用卧式平板胶检验阴极酶 带时，用7外胶，在 0.012M LiOH-0.2MH3BO3pH 7.5缓冲液，加样量20微升／孔 （20个 加样孔）和30微升／孔 （12个加样孔），电压140--150伏，电泳约4小时。染色液同前，，〔，，， 过氧化物酶染色液按下列比例混合，2%联苯胺：4务N氏CI:5%0EDTA