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第7卷 第2期 遗一传 学 报 Vol.7，No.2 1980年 6月 ACTA GENETICA S1NICA June,1980 远缘杂交的分子基础 — 通过远缘杂交后高粱DNA序列确实重组人水稻 ）‘ 周光宇 曾以申 杨晚霞 （中国科学院上海生物化学研究所） 在我国的农业科学研究中，不少人利用远缘杂交手段将植物间的某些优良特性相互 引入，并已有不少成功的例子11〔。在一部份远缘杂交的例子中，对它们的稳定的杂交后代 进行细胞学的光学显微镜观察，在染色体上未看见与母本有差异。但这些后代与母本比 较有颇多的变化，有些还显示出远缘父本的性状。对于这种现象人们存在着不同的看法。 有的认为既然在染色体水平上没有变化就不是杂交而是自然变异或母本品系不纯弓｝起的 分离现象。对于这些，周光宇L1--31提出DNA片段杂交的假设。即就整体而言，远缘植物 的基因组基本上是不亲和的，故引起杂交的不易成功或杂交后出现的不育、分离和排斥等 现象。但就个别基因或DNA序列而言，则可能存在着一定程度的亲和性，导致它们可能 重组入受体植物的基因组内。这些进入远缘受体的DNA片段有的可能得到表达，有的或 许会影响受体基因组的表达，有的可能是无意义的。周光宇等们〔从同工酶的分析已证实 DNA片段杂交的假设。本文从DNA分子杂交工作证明：高粱的DNA序列确实进人水 稻内。 实 验 部 分 植物种子 均由中国农业科学院作物育种栽培研究所提供，高粱稻No.4437及No. 77125为F12-13o 植物DNA的纯化 基本按曾以申法W［进行。 固相银坊DNA的制备 水稻银坊DNA经变性、切短为大约300核普酸后81「，在 2MNaCl溶液内与经过充分洗涤处理后的硝化纤维素 （上海红旗化工厂出品）混和，然后 在冰浴下搅拌吸附。约经1.5小时后取出，用2MNaC冲洗，将硝化纤维素置抽空干燥器 内过夜。次日在80℃下烘烤4小时，仍置抽空干燥器内。应用前加适量封闭液(9)，此封 闭液为0.2并小牛血清白蛋白，0.2务聚蔗糖 分（子量为4005000,Pharmacia出品），0.2务 聚乙烯毗咯烷酮 (polyvinylpyrroliclone),2XSSC。于600C下温育约4.5小时，过滤，用 2MNaCI冲洗一次即可用于杂交试验。 探针的制备 实验号790419系把高粱亨加利 DNA （已变性切短，下同）加入于 含有相‘同量银坊DNA的硝化纤维素内。600C温育约70分钟。过滤液在沸水浴内加热约 7-10分钟后再投人第二批固相银坊DNA。如此反复6次，得到的过滤液对0.5MNaC1-- 本文于1979年8月b日收到。 1上海师范大学生物系胡天喜和本研究组翁坚协助进行部份工作。 120 遗 传 学 报 7卷 0.06MNaAcpH4.6充分透析，然后用1251按Commer,ordlioa法标记之。标记后的DNA对 2XSSC溶液透析除去小分子的放射性物质。实验号79051系基本与No.790419相同，但 在标记前将DNA经组蛋白一ARSE一交联琼脂处理 载（体为本研究所马凤竹同志提供），此 吸附剂为：组蛋白工） 0 －、一⑨一｝-CHZCH,一悼 O 把载体重氮化后，在pH7.5下偶联组蛋白。这种固相组蛋白能从稀的DNA溶液中 （1.2 微克／毫升）较专一地吸附DNA，而对小牛血清白蛋白、多聚蔗糖和聚乙烯毗咯烷酮均不 吸附。每克湿重的载体可偶联组蛋白9毫克，并吸附DNA约500微克。经上述吸附剂处 理后的DNA再进行同位素标记。实验号790626系把亨加利DNA加入于含有相同量银 坊DNA的硝化纤维素内，60℃下进行杂交，并用微量泵不断使DNA溶液流经变性浴 (950C)，然后再回到60℃下与固