叠氮活化烟草多酚氧化酶Ⅱ机理.pdfVIP

戴 亚等叠氮活化烟草多酚氧化酶II的机理 1 烟气与化学 叠氮活化烟草多酚氧化酶II的机理* 戴 亚 施春华 汪长国 刘清亮 摘 要 至今人们一直报道叠氮作为金属蛋白(特别是铜蛋白)的一种抑制剂，本研究表明叠氮也可以作为烟草多酚氧化酶II(简称 blue CuO。Cu生成了Cu02 成，它恰是过氧化物--PPOII络合物的活性中心，其实质是过氧负离子起到激活剂的作用。 关键词：烟草多酚氧化酶叠氮活化铜蛋白质 中图分类号：TS413 文献标识码：A 文章编号：1004—5708(2004)06--0001—06 Escherichia 多酚氧化酶是一组铜蛋白，它们广泛分布于从菌 coli)也是两种结构方式结合叠氮，在血 类到哺乳动物的整个种族系列中[1]，他们的共同性质 是利用分子氧催化氧化多酚到醌[2]。PPOII已经从 Nicotiana烟草中成功地分离纯化出来[3]，它的分子量 为35600并且含有反铁磁性偶合的两个铜离子，PPOII处吸收的增加证实了它与活性中心的结合是终端式 的最适pH和温度分别为pH一6．5和40℃，我们的试的。 验表明，PPOII不能催化氧化对苯二酚和间苯二酚，对 叠氮可使金属酶中毒(特别是铜蛋白酶)。主要是 多酚氯原酸仅有很低的活性[4]。 它与活性中心的金属离子有强的配位能力，并改变了 由于叠氮分子能与许多含铜的酶形成配合物，至 活性中心的配位数和构象，消除了活性中心内金属离 今人们一直报道它是多酚氧化酶的抑制剂[5~7]，叠氮子的活性。在叠氮与铜氧化酶的反应中，叠氮分子可能 与铜的配位可能有3种类型的结构[8]，即肛一1，3桥式；阻碍了酪氨酸与铜的配合，从而妨碍了关键性中间体 肛一1，1桥式和1一终端式。根据N。一不对称伸缩振动的拉 的生成而抑制氧化酶的活性[1“，换句话说，叠氮保护 曼光谱实验得出的结论，十八烷基载体蛋白(艿去饱和 了酶使其不失去Cu(I)离子口5|。这结果可以设想在叠 氮与金属酶的相互作用中可能具有一种还不知道的功 酶)就是用两种方式与叠氮配位的，pH一7．8时的TI(1) 能。事实上，我们发现在低浓度下叠氮能激活烟草 终端式和pH7．0时的p一1，3桥式[9’1…。叠氮与氧化 PPOII，这与其他人报道叠氮总是铜蛋白的抑制剂是 过的细胞色素C氧化酶(来源于Paracoccus 不相同的。本文将讨论叠氮激活PPOII的机理和在激 dentrificans)的相互作用表明叠氮也是以两种形式结 合：强亲和方式，叠氮结合在近于双核中心的非金属位 活铜蛋白的过程中叠氮的新功能。 点上；弱结合方式，(Kd一4．1／_tm01)，叠氮以桥式结 1材料与方法 合于双核中心[10’¨]。细胞色素B氧化酶(来源于 1．1材料 *戴亚，男，57岁，教授，重庆烟草工业公司技术中心，重庆南岸区南 坪东路2号宏声大厦18F，重庆，400060 施春华，刘清亮，中国科学技术大学化学系，合肥，230026 G一 汪长国，通讯地址同第一作者。 SephadexA一50，CM—SephadexC一50和Sephadex 收稿日期：2003—11-27