一种移码差错率大幅度下降的聚合酶N端缺失体的研究.pdfVIP

遗 传 学 报， 26(2)：179一185，1999 Acta Genedca Sinica 一种移码差错率大幅度下降的 聚合酶N端缺失体的研究 张 洁 季朝能 杜汉森 郑佐华 毛裕民 复（旦大学遗传学研究所 上海 200433) 摘要 采用双引物定点突变法，构建了以236位氨基酸为起始密码子的Taq酶(TagND236)的 高表达质粒。并以一1移码突变质粒pFDPM118作为模板，建立了测定DNA聚合酶的体外 合成精确性的。pped-DNA系统．通过转化大肠杆菌TGl菌株后计数X-gal平板上蓝白菌落 的比例，测定了Taq和TagND236两种DNA聚合酶在DNA体外合成中的移码突变率，发现缺 失后的TagND236复制精确性提高了10倍以上。 关键词 定点突变，Taq酶，TagND236酶，缺口DNA，移码突变率 分类号 Q319 自从 1985年PCR方法问世以来[;，它已成为生物学、医学等领域的常用技术，在PCR 测序、PCR介导的定点突变等反应中，不仅要求DNA聚合酶有高的耐热性和催化活性，而 且