生产可降解塑料的基因工程菌的构建.pdf

摘要 摘要 由于具有生物可降解性、生物相容性、光学性、压电性、气体相隔性等许多优 良性能，而有可能在众多领域，如生物降解性包装材料、组织工程材料和缓释 材料等方面得到广泛应用，因此正日益引起了科研领域及工业界的广泛兴趣。 本文用聚合酶链式反应扩增并克隆了真养产碱杆菌(Alcaligeneseutrophus) 酶基因(phbC)，成功构建了含有phbA的表达载体并转入巨大芽孢杆菌中进行表 达，旨在提高PHB产量降低成本。论文取得了如下研究成果： 设计了PCR引物，以真养产碱杆菌中提取的总DNA为模板，采用PCR扩增 法克隆出phbA、phbB和phbC三段基因。 (2)选用大肠杆菌一芽孢杆菌穿梭质粒，成功构建了含有phbA的表达载体，并 转入巨大芽孢杆菌中进行表达。 (3)用菌落直接PCR法鉴定了重组质粒。 (4)摇瓶发酵研究表明，重组巨大芽孢杆菌可以利用葡萄糖、果糖、可溶性淀粉 和丁酸等多种碳源合成PHB，且细胞干重与PHB百分率都有了大幅度提高。 重组巨大芽孢杆菌可以利用可溶性淀粉等廉价底物，进一步降低PHB的生产 成本，也可以把丁酸作为PHB合成的前体，提高PHB的产量。 关键词：聚p一羟基烷酸酯；聚D-羟基丁酸；3-酮硫裂解酶基因；依赖NADPH 的乙酰乙酰CoA还原酶基因；PHB合成酶基因；真养产碱杆菌；巨大芽孢杆菌 Abstract Abstrct ofintracdlular family polyestersynthesizedby Polyhydroxyalkanoates(PHA)，a received attentionduetoitsexcellent bacteria,haveincreasing biodegradability, many and wellas biocompatibility,opticalactivitypiezoelectricity,aspotentialapplications inareas and ofbiodegradablepackaging，tissueengineeringdrugdelivery． reductase gene(phbA)，NADPH-dependentacetoacety—CoAgene p-ketothiolase of (phb8)andpoly—p-hydroxybutyrate(PHB)synthasegene(phbC)forbiosynthesis PHBwere andclonedfromchromosomalDNAof amplified Alcaligeneseutrophus cloned constructed usingPCR．ExpressionalplasmidscomaininggeneQhbA)Was andtransformedintoBacillus ofthethesisistoincreasethe megaterium．Thepurpose ofPHBanddecreaseits resultswereachievedfromthis output costs．Following thesis．