烯唑醇免疫亲和色谱柱的制备及其在样品前处理中的应用.pdfVIP

· 68· 色 谱 第 30卷 液中的 目标组分得 到纯化与 富集 。Chuang等 、 mL60％甲醇水溶液淋洗 ，收集流出液，采用 Jiang Stalikas等 制备 出对莠去津、敌菌灵有特异性亲 等 的问接竞争酶联免疫吸附分析法 (indirect 和力 ，可净化土壤 、沉积物、食 品等复杂样 品中杂质 competitiveenzym e—linked immunosorbentassay， 的IAC柱 ；韦林洪等 采用碳酰二咪唑法制备 出对 ic-ELISA)检测流出液中抗体含量并计算抗体包埋 绿磺 隆、克百威和三唑磷具有特异性亲和力 的多抗 率。若暂不使用 ，以含 0．02％叠氮化钠 的PBS平 体免疫亲和色谱 (MIAC)柱并用于河水和土壤 中绿 衡 ，于4℃下保存 ，备用。 磺隆、克百威 、三唑磷残 留的测定 。本研究采用溶 1．2．2 IAC固定相性能的测定 胶一凝胶法 (sol—ge1)，将对烯唑醇有特异性亲和力 的 烯唑醇的HPLC测定条件 ：色谱柱 XDB—C，柱 多克隆抗体与四甲氧基硅烷 (TMOS)聚合 ，制备 了 (250mm ×4．6mm)；流动相 ：甲醇一0．05％ HPO 免疫亲和色谱 固定相和免疫亲和色谱柱，建立 了灵 水溶液(70：30，体积比)；柱温：30℃；检测波长：258 敏快速 、高效可靠的烯唑醇免疫亲和色谱分析技术。 nm；流量 ：1．0mL／min；进样量 ：20 L。 将其应用于河水和水果等复杂基质 中烯唑醇的净 固定相非特异性吸附的测定 ：将含 l0mg／L烯 化 、富集 ，测定结果 的重复性 、准确度及分析的灵敏 唑醇的PBS溶液 2mL上样至对照 IAC柱上 ，自然 度等指标均符合烯唑醇残 留分析的要求。 重力过柱 ，收集流出液 ，HPLC法测定流出液中烯唑 醇含量 ，以对照 IAC柱流 出液中的烯唑醇含量与上 1 实验部分 样液中烯唑醇含量的比较判断固定相对烯唑醇有无 1．1 主要仪器与试剂 非特异性吸附。 Agilent1200高效液相色谱仪 ，带紫外 (uV)检 IAC柱动态柱容量 的测定 ：将含 l0mg／L烯唑 测器 (美国Agilent公司)；HY一6型双层调速多用振 醇的PBS溶液用蠕动泵上样至IAC柱上 ，分管收集 荡器 (江苏金坛市荣华仪器有限公司)；R．200型旋 流出液 (1．0mL／管) ，HPLC法测定流 出液 中的 转蒸发仪 (瑞士 BUCHI公司)；N．EVAP 111型氮 烯唑醇含量。当流出液中的烯唑醇浓度与上样液中 吹仪 (美 国Organomation公司)；聚 四氟 乙烯小管 的烯唑醇浓度相 同时，IAC柱达到饱和。依次用 1 及滤板 (5mL，美 国Agilent公司)。 mL30％甲醇水溶液 、3mL50％ 甲醇水溶液洗脱， 烯唑醇标准品 (纯度 97％，江苏七洲绿色化 HPLC法测定洗脱液中烯唑醇含量。按 Davis等 工股份有 限公司)；烯唑醇抗体冻干粉 (参考文献 的方法计算动态柱容量 (每 g固定相所能吸附的烯 [9]自制 ，抗体效价为 2．56×10)；四甲氧基硅烷 唑醇的质量)。 (Tetramethoxysilane，TMOS，Sigma公司)；叠氮 1．2．3 河水 中烯唑醇加标 回收率的测定 化钠 、吐温-20(分析纯 ，上海化学试剂公司)；pH 取南京紫金山下马坊河水 25mL，添加烯唑醇 7．4磷酸盐缓冲溶液 (PBS)；PBST(含0．05％吐温一 标准品使其质量浓度为 0．01、0．05、0．1、0．5、1．0、