Connexin43在机械应力诱导颈椎后纵韧带骨化进展过程中的作用研究.pdfVIP

第。次全军脊柱外科学术会议暨广东省医学会脊柱外科年会 脊髓火器伤在高温高湿环境下的实验研究 of Cord formGunshotinhot ExperimentalStudySpinalinjury andhumidenvironment 黄剑侯 上海长征医院骨科上海200003 【摘要】目的：探讨脊髓火器伤在高温高湿环境下的早期生命体征变化、呼吸功能改变以及原发伤 道近端脊髓的病理变化。方法：建立高温高湿环境下猪胸腰段脊髓火器伤在的动物模型，观察早期 全身及局部病理改变。结果：脊髓火器伤后6小时，猪平均体温升高2．4。C，Pa02进行性下降、PaC02 进行性升高，肺部广泛性出血，MAP进行性下降，局部病理损伤比常温组严重。结论：脊髓火器伤 在高温高湿环境下，全身的病理反应较常温组剧烈，局部病理损伤严重，其心肺功能损伤是加速早 期死亡的可能原因。 的作用研究 杨海松 上海长征医院骨科上海20003 ofthe 摘要目的颈椎后纵韧带骨化(ossificationposteriorlongitudinalligament，OPLL)是一种结缔 组织的后纵韧带演变为骨组织的病理状态，这种异位骨形成可持续进展而压迫脊髓和神经根导致患 者出现四肢麻木无力等临床症状，严重影响患者生活质量，多见于日本等亚洲国家，发病机制尚不 完全清楚。有学者认为后纵韧带成纤维细胞具有成骨细胞活性，比如细胞外矿化结节的形成和骨钙 素、碱性磷酸酶活性的增强，其在某种机制的作用下向成骨细胞转化，最终进展成为骨化组织而压 迫脊髓和神经根。既往研究亦显示后纵韧带骨化是一种多病因的疾病，有着复杂的基因和环境因素 共同作用。临床许多学者发现颈椎后路椎板切除或椎管成形术后由于破坏了颈椎后方结构产生颈椎 不稳而导致骨化明显进展，而在前路融合术后，去除了颈椎节段不稳因素，骨化进展明显减慢或完 全消失，提示机械应力刺激可能在后纵韧带骨化的发生发展过程中发挥着重要的促进作用。但是后 纵韧带骨化进展过程中涉及的信号传导通路目前仍在研究中。缝隙连接是一种连接相邻细胞的跨膜 蛋白，允许分子量小于1KD的分子穿透细胞膜从一个细胞进入另一个细胞从而起到信息传递的作用。 起着重要的作用，据研究发现，在connexin43缺如的成骨细胞，不但其矿化能力缺失而且对生物信 号的反应能力亦丧失。因此我们认为在颈椎后纵韧带骨化形成及进展过程中connexin43缝隙连接蛋 白有可能发挥着重要的信号传递作用。本试验体外培养颈椎后纵韧带骨化和非骨化患者的韧带细胞， ．．652． 第一次全军脊柱外科学术会议暨广东省医学会脊柱外科年会 探讨细胞的培养方法，验证后纵韧带骨化组韧带成纤维细胞的成骨活性及机械应力刺激在后纵韧带 骨化进展过程中的促进作用，同时证明connexin43缝隙连接蛋白的信号传递作用。 (颈椎外伤14例，颈椎间盘突出4例及颈椎病2例)行颈前路手术治疗，术中切取所有患者的韧带 标本，无菌条件下置入已消毒的含无血清DMEM的标本管内，37C条件下迅速送往细胞培养室。4 例颈椎后纵韧带骨化之标本采用酶消化培养法，其余40例标本采用组织块培养法进行细胞体外培 养。采用免疫细胞化学及免疫荧光技术检测所培养细胞胞浆内波形蛋白从而进行细胞鉴定。将传至 细胞的总RNA和蛋白，采用半定量RT-PCR及Western blotting技术检测两组细胞三个成骨特异指标 I)和缝隙连接蛋白Cx43表达量的差异。采 骨钙素(OCN)、碱性磷酸酶(ALP)及I型胶原(COL 胞进行机械应力刺激，分别在应力刺激前，刺激后12h和24h三个时间点提取细胞总的RNA和蛋白， I及Cx43表达量的差异。设计合成针对Cx43 分别检测两组细胞在三个不同时间点OCN、ALP、COL 2000细胞转染试剂转染于骨化组第三代细胞内，持续转染 的特异siRNA序列，采用Lipofectamine 48h。Western blotting技术检测转染效率，同时采用RT．PCR技术测量转