乙醇酸氧化酶重组毕赤酵母的构建及其催化合成乙醛酸工艺条件初步优化.pdfVIP

摘要 摘要 乙醇酸氧化酶(glycolateoxidase，GO)是一种黄素蛋白酶，它以氧作为电 子受体，能催化乙醇酸至乙醛酸的氧化反应。产物乙醛酸是一种重要的化工中 间体，可以广泛应用于医药、香料、农药等领域。生物法合成乙醛酸具有污染 少，转化率高，产品纯度高等优点，因此是很有前途的合成乙醛酸工艺路线。 目前生物法合成乙醛酸主要是利用乙醇酸氧化酶将乙醇酸氧化成乙醛酸，同时 利用过氧化氢酶消除反应产生的过氧化氢，防止产物的进一步氧化。本研究目 的在于通过构建基因工程菌来催化合成乙醛酸，主要内容包括GO的毕赤酵母 重组茵构建、重组菌的发酵条件、重组菌催化合成乙醛酸条件。 片断。通过基因重组将GO基因克隆到载体pA0815中，构建了胞内表达载体 体。胞内蛋白采用SDS．PAGE电泳分析，结果显示诱导表达蛋白的分子量约为 40 kDa。甲醇诱导重组菌表达，并对诱导的条件进行优化，确定最佳的pH为 6．0，最佳的表达时间为96h，最佳混合碳源为10g／L山梨醇和0．5 g／L甲醇。 在最佳的培养条