素对拟南芥SEN1基因表达的影响.pdfVIP

1 期 俞超等: 磷和葡萄糖及细胞分裂素对拟南芥SEN1 基因表达的影响 85 磷和葡萄糖及细胞分裂素对拟南芥SEN1 基因表达的影响 俞超，侯兴亮，吴平* (浙江大学生命科学学院，杭州 310029) 摘要：拟南芥SEN1 基因受衰老诱导。将该基因启动 芥作为材料，通过不同营养元素、葡萄糖及抑制 子融合报告基因萄聚糖酶(glucuronidase,GUS)基因转入 剂与细胞分裂素的各种处理，观察SEN1 表达并测 拟南芥，通过染色并测定GUS 活性发现，缺氮、缺磷、 定 GUS 活性，分析不同条件下SEN1 基因在拟南 缺钾诱导叶中SEN1 表达，而只有缺磷能导根中SEN1 芥中的表达情况，从而揭示SEN1 表达与营养和激 表达。缺磷对根叶中SEN1 的诱导被3% 葡萄糖和细胞 分裂素抑制。3% 葡萄糖胺在根和叶中均诱导SEN1 表 素调控的关系。 达，外源细胞分裂素不能抑制这种效应。结果表明： SEN1 基因可受缺磷信号特异调控，并受糖信号和细胞 1　材料与方法 分裂素负调控；葡萄糖胺能大大促进根和叶中SEN1表 达，且不受细胞分裂素的负调控。 1.1　实验材料 野生型拟南芥(Arabidopsis thiliana, Col-1 )及 关键词：SEN1；拟南芥；GUS 活性；磷；葡萄糖；细 SEN1 启动子融合 GUS 转基因株系。 胞分裂素 1.2　载体构建与转基因拟南芥筛选 中图分类号：Q7 4 利用 Oligo 软件设计引物，用 PCR 方法从拟 南芥基因组中克隆出SEN1 启动子，全长 1 818 bp， SEN1 是从拟南芥中受衰老诱导的基因，拟 上游引物5 CTCTAAGCTTAAATATGGCAGTTC- 南芥生长 25 d 后，SEN1 基因表达增强。该基因 AATGTCACC 3 ，下游引物5 TTCATCTAGA- 由5 个外显子组成，编码 182 个氨基酸，5 上游 AAACTTCTTTTAGAATGCTTTGATGCTA 3 。 区包含类似干旱、ABA 等反应元件及胁迫诱导基 SEN1 启动子用T4 聚合酶补平后，用HindIII 酶切， 因中的保守TCA 。黑暗处理下的连体幼叶和老叶 连入 SmaI 和HindIII 酶切后的pCAMBIA1391z 质 中该基因表达都很强烈(Oh 等 1996)。因此SEN1 粒，测序检测后，转入 E H A1 0 5 农杆菌。 可以作为研究植物衰老的标记基因，其表达的调 拟南芥转基因采用农杆菌浸润法 ( Y e 等 控研究有助于对植物衰老机理的深入了解。 1999)。转基因拟南芥在温度为22~24 ℃、湿度为 Northern 检测发现，生长 30 d 的拟南芥缺磷 -2 -1 60%~70% 、光强为 150 µmol m s 、日照长度 6 h 后，叶中 SEN1