脂质体介导的VEGF-C反义寡核苷酸对肺癌微淋巴管生成的影响.pdfVIP

VEGF—C 巴管生成的影 响 第 12 · l703 · 脂质体介导的VEGF—C反义寡核苷酸对肺癌微淋 巴管生成的影响 丁成智 钱永跃 郭旭峰 徐中华 徐忠恒 (苏州大学附属第二医院胸心外科，江苏 苏州 215004) [摘 要] 目的 观察脂质体介导的血管内皮生长因子C(VEGF—C)反义寡核苷酸对肺癌裸鼠皮下种植瘤模型微淋巴管生成的影响。方法 建立BALB／C小 鼠皮下肺癌模型30只，随机分为磷酸盐缓冲液对照组 (PBS组)、正义寡核苷酸对照组 (SODN组)和反义寡核苷酸干预组 (AODN 组)。接种人肺腺癌细胞株A549后24h内，分别用PBS、SODN及AODN皮下注射进行治疗，观察小鼠肿瘤的生长情况。4W后，处死动物，留取瘤体 标本，采用RT．PCR、Western印迹和免疫组织化学方法检测VEGF—C反义寡核苷酸对种植瘤中VEGF—C表达水平和微淋巴管生成的影响。结果 AODN组VEGF—CmRNA和蛋白表达量降低 (4．61±1．57)，与对照组比较差异显著 (P0．05)；种植瘤 内微淋巴管密度为 (3．2±1．7)，明显低于对 照组(P0．01)。结论 脂质体介导的VEGF—C反义寡核苷酸可以显著降低肺癌裸鼠皮下种植瘤模型VEGF—C的表达水平，并对其微淋巴管生成具 有较强抑制作用。 [关键词] 肺癌 ；血管内皮生长因子一C；基因治疗 (中图分类号] 11735．1 [文献标识码] A [文章编号] 1005-9202(2010)12-1703-03 非小细胞肺癌 (NSCLC)约占肺癌80％，随着对综合治疗和 扩增产物 163bp，由上海生工公司合成。兔抗人多克隆抗体 个体化治疗的认识不断加深和推广，NSCLC的治疗已经有了很 VEGFC、VEGFR一3及免疫组织化学试剂盒 PV-9000均购 自北 大提高，但 目前5年生存率仍低于 15％…。一般认为，肿瘤细 京中山生物技术公司。 胞的侵袭性和转移性是决定肿瘤类型和患者死亡的主要原因， 1．2 实验方法 因此明确肿瘤细胞转移和肿瘤细胞之间相互作用的分子机制 1．2．1 人肺腺癌细胞株A549裸 鼠皮下种植瘤模型建立和分 对肿瘤的治疗有重要意义。目前认为，抗肿瘤的血管生成和淋 组 取对数生长期A549细胞 ，经2．5g／L胰酶 +0．2g／LEDTA 巴管生成是有效治疗肿瘤的主要途径之一 。我们前期研究 消化液消化后 ，PBS洗涤 2次，离心5rain(1500r／min)，弃上 结果已经证实，肺癌细胞通过高表达血管 内皮生长 因子 C 清 ，加生理盐水制成单细胞悬液 ，细胞密度为 1×10。个 ／ml，以 (VEGF—C)与淋巴管内皮细胞VEGFR．3特异性结合刺激肺癌 0．2ml／只接种于BALB／C小鼠右腋皮下。建模 1W后，随机分 新生淋巴管生成 。本研究通过建立肺癌裸 鼠皮下种植瘤模 为磷酸盐缓冲液对照组 (PBS组)、正义和反义寡核苷酸对照组 型，研究脂质体介导的VEGF—C反义寡核苷酸对肺癌细胞 (SODN组和AODN组)，每组各 l0只。 VEGF—C表达水平和种植瘤内微淋 巴管生成的影响，来寻找肺 1．2．2 脂质体 (Lip)+ODN复合物的制备和作用 FuGENE6 癌基因治疗新方法。 Lip由阳离子脂质DOTMA和中性磷脂 DOPE按 1：1(w／w)比 例在膜过滤生理盐水中合成，每毫升含 1mg。按 l g：2 l的 1 材料与方法 比例将AODN和SODN及脂质体轻柔混匀，室温下静置30min， 1．1 材料 制成Lip+ODN复合物。 1．1．1 细胞及动物 肺癌 A549细胞株由山东大学齐鲁医院 1．2．3 干预方法和动物取材 寡核苷酸用量为每次 10mg／kg 胸