应用于染色体步移的PCR扩增技术的研究进展81715.pdfVIP

维普资讯 遗 传 HEREDITAS(Beijing)28(5)：587~,595，2006 专 论 与 综 述 应用于染色体步移的 PCR扩增技术的研究进展 刘 博1,2，苏 乔’，汤敏谦 ，袁晓东 ，安利佳’ (1．大连理工大学环境与生命科学院，大连 116023}2．宝生物工程(大连)有限公司，大连 116600) 摘 要 ：各种建立在 PCR基础上染色体步移 的方法能够根据 已知的基 因序列得到侧翼的基因序列。染色体步移技 术主要应用于克隆启动子、步查获得新物种中基因的非保守区域、鉴定T—DNA或转座子的插入位点、染色体测序工 作 中的空隙填补 ，从而获得完整 的基 因组序列等方面 。其方法主要有 3种 ：反向PCR的方法 ，连接法介导的PCR 的方法 以及特异引物 PCR的方法 。文章就各种方法进行举例说明并加 以分析 比较 。 关键词 ：染色体步移 ；反向PCR；连接法 PCR；特异引物 PCR 中图分类号 ：Q75 文献标识码 ：A 文章编号=0253—9772(2006)05—0587—09 ProgressofthePCRAmplificationTechniquesforChromosomeWalking LIU Be’ ，SU Qiao’，TANG M in．Qian ，YUAN Xiao-Dong ，ANLi-Jia’ (1．SchoolofEnvironmentalandBiologicolScineceandTechnology，DalionUniversityof Technology。Dalian 116023，China；2．TaKaRaBiotechnology (Dalian)Co．，Ltd．Dal／no 116600，China) Abstrsct：VariousPCR-basedmethodsareavailableforchromosomewalkingfrOm aknownsequencetoanunknown region．Itisprmo isingingenome-relatedresearchforthefollowingexperiments：promotercloning，obtainingnon-corl- servativepartsofgenesinnew spe cies，identificationofT-DNAortransposno insertino sitesandfillingingapsorun- knownchrmo osmo eregionsingenmo eseque ncing．Thesemethodsconsistedofthreetype s：inversePCR，ligatino -me- diatedPCR andspe cificprimerPCR．Inthisreview ，we illustratedandcmo paredthecurrenttechniques． Keywords：chrmo osomewalking；inversePCR{ligation-mediatedPCR；specificprimerPCR 获得与已知序列相邻 的未知序列的染色体步移 经完成的少数物种 (如人 、小鼠、线虫、水稻、拟南芥 技术是一项重要的分子生物学研究技术。染色体步 等)来说，可以轻松地从数据库 中找到已知序列 的侧 移技术主要有 以下几方面的应用 ：(1)根据已知的基 翼序列 。但是这毕竟只是研究少数模式生物时的情 因或分子标记连续步移获取人、动物和植物的重要 况，对于 自然界 中种类繁多的其他生物而言 ，在不知 调控基因，用于研究结构基因的表达调控 ，如 ：分离 道它们 的基因组 DNA序列 以前 ，想要知道一个 已知 克隆启动子并对其功能的研究 ；(2)步查获得新物种 区域两侧的DNA序列 ，只能采用染色