环介导等温基因扩增技术及其应用研究进展01081.pdfVIP

维普资讯 环介导等温基因扩增技术及其应用研究进展 常小斌，刘 洵，程天印，王小君，陈宇明 (湖南农业大学 动物医学院，长沙 410128) 摘要：本文简单综述了环介导等温基 因扩增7}-~(LAMP法)的基本原理，操作方法及其研究进展。LAMP法是一种简 便、快速、高效、特异性很强的基因扩增方法，尤其适合于人类和动物疫病的检测。 关键词：环介导等温基因扩增；人类和动物疫病；检测 i 嚣茹：鬻辫 慧 ： 基因扩增技术是分子生物学领域的一项重要的研究手 芝 l 辑l 聃 张 段，人们已经建成了多种方法，其中PCR技术是众多方法中 ： 粕． 。 =三 应用最为常用的…种。但是，在应用过程中人们发现它仔在 回 勰 很多不足之处：(1)靶基因易被污染。(2)常引起非特异性扩 增。(3)多种因素可以产生抑制扩增反应。(4)需要比较昂贵 图1 FIP与靶序列杂交启动复制一条新链 的PCR仪。(5)扩增反应时间较长，一般需要JL／J,a~，不利于 外 I物F3与靶 DNA的F3C序列杂交 ，开始靶 DNA互 在基层实验室推广应用。 补链的合成，同时置换mFIP引物合成的DNA链。F3比较 为了解决上述不足，科学家努力寻求操作更简便 、特异 短且浓度较低，故它与靶DNA杂交稍滞后。释放的FIP引物 性更强、扩增速度更快的基因扩增方法 2000年}j本学者 合成链5’末端的Fl和F1C互补配对，故在末端形成环状结 Notomi等发明一种新型的环介导恒温扩增法(即LAMP法)。 构(图2)。 该方法利用一套(4种)特异性引物，以识别靶基 的六个特 哦 黧 ％ r — —冀霉案 器冀 定区域。反应在等温条件下进行，不需要循环仪等昂炎的仪 器；扩增反应极快，一般在一小时内完成；扩增产生的产物量 j麓二 大，肉眼、电泳或比浊仪均可判度结果；灵敏度高、特异性强， 嚣 ；。。。 ： 。Rl： ：?矗 ：一 ’ 极适于病原检测用。故本法一经面世，即受到多曰学者的关 注。但是 ，我国在此方面的研究极少，从已有的文献看，只李 靴睽 m m：|I壹2 。…； J 青雅等模仿榆测人乙型肝炎和淮亚红等l辟】日产试剂盒鉴定 程鞠曩 胚胎性别的报告。为此，笔者所在的课题组开展_r该技术的 图2F3与靶 DNA杂交，合成靶DNA的互补链 ，释放 研究。并且已经建丑藤黄微球菌 、鸡新城疫和大肠杆菌 F18 FIP引物合成链。 受体Lamp检测方法，现孰建立体会和国内外有关文献，综 同理 ，BIP(图2)与置换链 DNA杂交，开始新链的合成。 述如下： 然后 B3引导合成FIP引物合成链的互补链 置换释放 BIP 1 LAMP法的原理 引物合成链，其两端形成环环状结构(图3)，此结构即LAMP Lamp法是利用链置换反应和环介导进行基困扩增，详 法循环扩增反应的起始物。 细过程如下 ： 罔3B3引导合成FIP引物合成链的互补链，置换释放 1．1 循环扩增反应启始物的形成 扩增反应开始后，首先 BIP引物合成链，其两端形成环状结构 是内引物F[P与靶 DNA的F2C区域杂交，在瞻l聚合酶作