第4章荧光分析法.pptVIP

荧光分析法 药物分析教研室 第一节 基本原理 第二节 定量分析方法 第三节 荧光分光光度计与新技术 第四节 应用与示例 相关定义(一) 荧光 物质分子吸收光子能量而被激发，然后从激发态的最低振动能级返回到基态时所发射出的光。 荧光分析法 根据物质的荧光谱线位置及强度进行物质鉴定和物质含量测定的方法 。 相关定义(二) 分子紫外-可见荧光分析法 有些物质的分子，在用紫外-可见光激发时，能发射荧光，由此建立的方法。 优 点 灵敏度高：检出限可达10-10~10-12g/ml 选择性好 FL与UV比较(一) 相同点 λ区段：Vis-UV区 适用性：均可用于定性定量， 多用于定量 定量方法：相似 样品性质: 以液体为主 用 量：均少 分析时间：均快 操作难易程度：易 FL与UV比较(二) 不同点 第1节 基本原理 分子荧光的产生 激发光谱与荧光光谱 荧光与分子结构的关系 荧光和磷光产生示意图 二、激发光谱与 发射光谱 定 义 硫酸奎宁的激发光谱a 及荧光光谱b 激发光谱与发射光谱 特点 荧光光谱形状与λex无关 荧光光谱与激发光谱互为镜像 斯托克斯位移：荧光发射波长总是大于激发光波长的现象。 蒽的激发光谱及荧光光谱 蒽的能级跃迁 三、荧光与分子结构 （一）荧光效率 （二）荧光与分子结构的关系 （一）荧光效率 荧光效率 激发态分子发射荧光的光子数与基态分子吸收激发光的光子数之比，常用φf表示： φf = 发射荧光的光子数 吸收激发光的光子数 φf (0~1) φf 大的有荧光发射 二、荧光与 分子结构的关系 产生荧光的两个条件： 强紫外-可见吸收 共轭的π→π*跃迁 一定的荧光效率 影响荧光强度因素（内部因素） 共轭效应 分子的刚性与共平面性 取代基效应 共轭效应 绝大多数能产生荧光的物质都含有芳香环或杂环，因为芳香环或杂环分子具有长共轭的π→π*跃迁。π电子共轭程度越大，荧光强度（荧光效率）越大，而荧光波长也长移。 苯 萘 蒽 λ ex 205nm 268nm 356nm λ em 278nm 321nm 404nm φf 0.11 0.29 0.36 分子的刚性与共平面性 在同样的长共轭分子中，分子的刚性和共平面性越大，荧光率越大，并且荧光波长产生长移。 取代基效应 第一类取代基：－NH2、－OH、－OCH3、－NHR、－NR2、－CN等 第二类基团：－COOH、－NO2、－C＝O、－NO、－SH、－NHCOCH3、－F、－Cl、－Br、－I等 第三类取代基：－R、－SO3H、－NH3＋等 四、影响荧光强度的 外部因素 温度：温度升高，荧光物质的荧光效率和荧光强度下降 溶剂：溶剂极性增大，荧光波长随着而长移，荧光强度增强；溶剂粘度减小，荧光强度减小 影响荧光强度的外部因素 pH值的影响：当荧光物质本身是弱酸或弱碱时，溶液的pH值对该荧光物质的荧光强度有较大影响，这主要是因为弱酸弱碱分子和它们的离子结构有所不同，在不同酸度中分子和离子间的平衡改变，因此荧光强度有差异 苯胺在不同pH值下有下列平衡关系 影响荧光强度的外部因素 荧光猝灭剂： 荧光熄灭是指荧光物质分子与溶剂分子或溶质分子相互作用引起荧光强度降低的现象。 引起荧光熄灭的物质称为荧光熄灭剂。 荧光猝灭的形式： a、碰撞 b、生成不发光配位化合物 c、荧光物质氧化 常见的荧光熄灭剂 卤素离子、重金属离子、氧分子、硝基化合物、重氮化合物、羰基化合物、羧基化合物 影响荧光强度的外部因素 散射光的影响： 瑞利散射光 拉曼散射光 干扰荧光测定，应采取措施消除 硫酸奎宁在不同波长激发下的荧光与散射光谱 第2节  定量分析方法 (一)荧光强度 与物质浓度的关系 (二)定量分析方法 溶液的荧光 (二)定量分析方法 1.标准曲线法 2.比例法 3.多组分混合物的荧光分析 定性分析 依据： 激发光谱 特征光谱 荧光光谱 方法： 对照品对照 第3节  荧光分光光度计与新技术 荧光分光光度计由激发光源、激发单色器和发射单色器、样品池、检测器及读出系统组成 激发光源 高压氙灯 ——强谱线的连续光谱