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ISSN 2005 6
CN 113870Q Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biolo y 21( 3) : 421~ 426
技术与方法
王先良, 王小利, 苏艳华, 张 迟, 张莉君,
*
李 芳, 李柏生, 李晓波, 徐淑雷, 李媛媛, 徐顺清
( 华中科技大学同济医学院环境医学研究所, 武汉 430030)
以凝血酶适体( aptamer) 为例, 利用适体和核酸外 酶特性, 通过定量PCR 扩增建立一种高
灵敏的蛋白质检测方法. 首先合成3 段寡核苷酸序列即凝血酶适体探针, 上游连接子和下游连接
子. 将适体探针与凝血酶温育结合后, 再加入核酸外 酶I 降解未能结合的探针. 接着将保护下来
的探针与连接子杂交连接和对连接产物进行定量PCR. 分别建立连接产物标准品浓度与 Ct 值的
标准曲线和凝血酶浓度与连接产物浓度的标准曲线, 通过定量PCR 对凝血酶进行定量. 结果显示,
基于适体的外 酶保护凝血酶检测方法灵敏度较高, 连接产物标准品浓度的对数值和C 值之间的
t
2
方程为:y = - 295x+ 3365( R = 0990, P 001) ; 凝血酶浓度和连接产物浓度对数值之间的方程
2
为y= 094x- 029( R = 0998, P 001) , 还对可能影响检测的有关参数举行了探讨.
蛋白质检测, 适体, 酶 保护分析, 实时PCR, 凝血酶
Q503,Q51
A Highsensitive New Method to Detect Proteins Based on DNA
Aptamers and Exonuclease
WANG XianLian , WANG XiaoLi, SU YanHua, ZHANG Chi, ZHANG LiJun, LI Fan ,
*
LI BaiShen , LI XiaoBo, XU ShuLei, LI YuanYuan, XU ShunQin
( Institute of environmental medicine, Tongj i Medical College, Huazhong University of Science and Technology , Wuhan 430030, China)
Abstract Aptamers are sin lestranded oli onucleotides with a len th of tens of nucleotides and sin le
stranded DNA aptamers have a very hi hly ordered tertiary structure, which allows them to form stable
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