一种模拟血管微环境的药物筛选模型的设计及实验研究.pdf

II Preliminary Research of Designing Drug Screening Model Based on Simulating Microvascular Biofluids A Thesis Submitted to Chongqing University in Partial Fulfillment of the Requirement for the Master ’s Degree of Science By Yingqian Xu Supervised by Prof. Wang Bochu Specialty: Biomedical Engineering College of Bioengineering of Chongqing University, Chongqing, China April, 2014 IV 中文摘要 摘 要 药物研发是一个非常耗费时间、人力和物力的过程，虽然很多先导候选药物 在体外有很好的药理活性，但当它们进入动物或者临床试验的时候，都表现出很 低的生物活性，甚至出现了一些显著的副作用，因此大多数新候选药物都在临床 试验中被淘汰。体外与体内药物代谢的微环境之间存在的差异，很有可能是导致化 合物在体外表现出很好的效果、而在体内却没有显著效果的重要原因。 基于此，本课题建立了一种可以模拟血管微环境的药物筛选模型，以提高药 物筛选的效率。血管发生病变的部位，血管壁主要受到低剪切力或震荡剪切力的 作用，而血管壁的平滑肌可与内皮细胞形成血管肌- 内皮缝隙连接，实现电信号和 小分子物质的相互传递，对血管的生理和病理状态有重要的影响。因此为了模拟 血管病变部位的微环境，我们设计和建立了一种可以提供低剪切力，并且能实现 内皮和平滑肌细胞联合培养的流动腔。首先，对流动腔进行了流体数值模拟分析。 然后，建立了模拟血管微环境的药物筛选模型，并选择内皮细胞的形态指数和凋 亡率、血小板衍生生长因子、超氧化物歧化酶、丙二醛、平滑肌细胞的迁移率作 为验证模型有效性的指标，选择临床药物曲匹地尔和丹参作为模型药物。最后， 利用该模型对丹参提取物中，具有抗血管疾病的活性物质进行了筛选，通过与传 统的药物筛选模型进行对比，更进一步验证了我们所建立的药物筛选模型的有效 性，并且由于该模型在体外模拟了血管的微环境，因此有助于提高药物筛选的效 率，具有为药物研发节约时间和成本的潜在优势。 本课题的主要研究内容和相应结果如下： ①设计了一种可以提供低剪切力，并能满足细胞联合培养的流动腔，作为模 拟血管微环境的载体。利用Fluent6.3 软件对不同长度的流动腔（100mm、90mm、 80mm、70mm 和 60mm ）内部的流体状态进行了数值模拟。结果表明，随着流动 腔长度逐渐缩短，细胞培养区域流体的速度和剪切力波动逐渐增大。当流动腔长 2 2 度为70mm 时，剪切力大小在4dyn/cm -6.5dyn/cm 范围内，细胞培养区域的剪切 力出现了两个峰值，这可能是通道中再循环涡流处的高流速梯度导致。因此，为 了在体外模拟振荡低剪切力的情况，我们选择 70mm 的流动腔长度进行后期的实 验。 ②建立了模拟血管微环境的药物筛选模型，该模型由流动腔、恒流泵和储液 瓶构成。流动腔可以为内皮细胞提供一个与血管损伤部位相似的低剪切力，流动 腔内联合培养的内皮细胞和平滑肌细胞通过半透膜进行物质和信息的传递，该模 2 型很好地模拟了体内血管的微环境。考察了不同大小的剪切力（1dyn/cm 、