全基因组DNA甲基化对甘蓝型油菜春化作用影响.pdf

摘要 摘 要 开花是高等植物由营养生长向生殖生长的转变过程，是植物个体发育和 后代繁衍的关键发育时期，这一发育的转变过程是通过植物体内部自身的发 育条件和外部的环境因素共同决定的，温度是影响植物开花的一个重要的环 境因素。我国种植的油菜90％属冬油菜，冬油菜在苗期需要经受一段低温时 期才能开花结实，这个发育时段称为春化作用，它是决定甘蓝型油菜由营养 生长向生殖生长转变的关键时期，在甘蓝型油菜遗传育种和种子繁育生产中 十分重要。已有研究结果表明，DNA去甲基化在植物春化作用中发挥了重要 作用，有关DNA甲基化与植物基因表达调控的关系目前主要集中于模式植 物拟南芥，近年来在小麦、白菜等植物上也有报道，表现在春化过程中植物 DNA甲基化水平降低，促进植株开花。 本文以甘蓝型油菜金裕油1号为实验材料，初春以5d为间隔将甘蓝型油 菜分期播种在实验田里，通过分期播种模拟油菜植株通过低温春化作用的时 间，以植物现蕾开花为转入生殖生长和通过春化的标准，田间调查各期通过 春化的植株及比率，采用甲基敏感扩增片段多态性(MSAP)技术进行全基 因组甲基化程度检测，利用Excel2010和Origin7．5软件，分析各个时期、通 过春化不同状态植株的基因组DNA甲基化水平和模式改变；与此同时，选 用甲基化抑制剂5．氮杂胞苷处理甘蓝型油菜无菌苗，为促进开花和人工春化 技术提供理论基础。 主要结果报告如下：(1)不同播期(春化时间长短不同)的甘蓝型油菜， 植株基因组DNA甲基化水平都有所降低，但降低的水平不同。植株基因组 DNA甲基化水平相对越低，植株通过春化的比率相对越高；同一期里面，通 过春化的植株基因组DNA甲基化水平(12．50％)略低于未通过春化的植株 (13．38％)。(2)甘蓝型油菜春化过程中发生以去甲基化为主的模式变化， 同时发生小部分的DNA甲基化现象，且基因组DNA半甲基化比率(7．76％ 至10．49％)均高于完全甲基化比率(2．47％至4．89％)。(3)萌动种子经不同 理后，高浓度严重抑制幼苗的株高和根长，9个处理的子叶基因组DNA甲基 摘要 化水平都有不同程度的降低，对照组子叶的基因组DNA甲基化水平为 15．62％，处理组分别比对照降低了35．3％、35．65％、35．65％、33．93％、34．63％、 32．26％、31．95％、36．75％和40．59％；但是各个处理之间基因组DNA甲基化 水平变化不大，差异不显著；各组发生以去甲基化为主的模式变化，去甲基 化比率(10．48％至7．46％)高于甲基化比率(1．61％至4．48％)。 甘蓝型油菜春化过程中发生以去甲基化为主的模式变化趋势，同时发生 小部分的DNA甲基化现象。不同播期甘蓝型油菜基因组DNA甲基化水平降 低的程度不同，基因组DNA甲基化水平降低越低，植株通过春化作用的比 率越高；同一期里基因组DNA甲基化水平以12．50％的植株能通过春化作用， 而13．38％的植株则未能通过春化作用。推测在春化过程中，甘蓝型油菜通过 降低基因组DNA甲基化水平调控植物春化作用相关基因表达，当植株基因 组DNA甲基化水平降低到一定水平(12．50％)则能通过春化作用，反之， 则不能通过春化作用。这为甘蓝型油菜促早开花技术和人工春化技术提供理 论基础和参考。 关键词：春化作用DNA甲基化甲基敏感扩增片段多态性甘蓝型油菜 Abstract Abstract whichisthe oftransformationof from Flowering process higherplants to isa of vegetativegrowthreproductivegrowthkeydevelopmentalstageplant andfuture of of developmentgenerationsbreeding．Thisdeve