硕士学位论文黄鳝抗菌肤hePiin基因ORF的克隆.docVIP

硕士学位论文 黄鳝抗菌肤hePcidin基因ORF的克隆与 目录 摘要二”..“”””…“.”.““.””“””””二“““””二””””““““”“”””””.”“二““”””””””“““““““”””.”:.”.““二”“”.”.1 常用缩略词……IV 目录 第一章绪论”.“”.6“““”””.”.”””.“““.““””.”””“”“..““:.“”””“”””””.”““““”““”””””””.”.“”.“”“””””.””.1 第一节鱼类抗菌肤的研究……l 1鱼类抗菌肤的分类…… 1.1不含半肤氨酸形成a螺旋结构 1.2含有多个半肌氨酸形成p折叠结构……2 1.3组蛋白样的抗菌肤……2 1.4具有糖基化修饰的抗菌肚……2 2鱼类抗菌肤的生物学活性……2 3鱼类抗菌肤的抗菌机制……3 4鱼类抗菌肤表达特异性……4 第二节抗菌肤hepeidin的研究进展……。……5 1HePcidin的分子结构……5 2HePcidin的表达调控……6 3HePcidin的功能活性……7 第三节抗菌肤基因工程及应用前景……7 l抗菌肤的基因工程……，……7 1.1大肠杆菌表达系统……8 1.2酵母表达系统……10 2应用前景……10 第四节本实验的目的意义、技术路线……n 1目的意义……。……11 2技术路线……12 第二章黄鳝hepcidin基因ORF的克隆二”..“””.”””.”:.“”…”“.””“”二”二”””二““二“”““““..””“”.””.“”.13 2.1材料……13 2.1.1实验材料……13 2.1.2主要试剂及仪器……，..……，二，……13 2.2方法……巧 22.1hePc记in基因O盯克隆策略……巧 2.2.2hepe记in基因引物的设计……，……巧 2.2.3总RNA提取……巧 2.2.4反转录……16 2.2.5ORF扩增……，……16 2.2.6目的片段回收……17 /舒黄鳝抗菌肤hepeidin基因ORF的克隆与原核表达 2:27连接……17 2.2.8转化……，……18 2.2.9测序验证……18 2.3结果与分析……18 2.3.1总RNA提取……18 2.3.2hepe记in基因。盯克隆……19 2.3.3测序验证……19 2.4讨论……20 2.5小结……，……21 第三章H印cidin氨基酸序列的生物信息学分析一“““..””““““““”“”“““””””””“”“”””””””“““““““.22 3.1材料……22 ，山，白勺‘2白勺，‘3.2网络资源及应用软件 3.2.1网络资源 3.2.2应用软件 3.3方法……23 3.3.1氨基酸组成、分子量、等电点分析……23 3.3.2信号肚分析……23 3.3.3跨膜区分析……23 3.3.4疏水性分析……23 3.3.5蛋白质二级结构预测……，……23 3.3.6蛋白质三级结构预测……24 3.3.7蛋白质功能结构域分析……24 3.3.8多序列分析及基因进化分析……24 3.4结果与分析……，……24 3.4.1编码的氨基酸序列……24 3.42蛋白质基本性质分析……25 3.4.3信号肤分析……，……26 3.4.4跨膜区分析……26 3.4.5疏水性分析……，……27 3.4.6HePcidin编码蛋白质二级结构预测……28 3.4.7编码蛋白质三级结构预测……31 3.4.8结构功能域分析……犯 3.4.9同源性分析……33 3.5讨论……35 3.6小结……35 第四章黄鳝抗菌肤hepcidin原核表达载体的构建及表达.”.”“”.“““””””””””””一“.””“.”””.“二””….37 7，月矛几J八、一内j4.1材料 4.1.1实验材料…… 4.1.2主要试剂及仪器四川农业大学硕士学位论文 4.2方法……，……38 4.2.1HePcidin基因原核表达载体的构建……38 4.22黄鳝抗菌肤hePcidin的原核表达……41 4.3结果与分析……43 4.3.1加酶切位点引物的PcR扩增……‘····.·...··························……43 4.3.2目的基因片段与表达载体pET32a(+)的双酶切鉴定……44 4.3.3重组质粒的双酶切鉴定···································……45 4.3.4重组表达质粒的序列鉴定···········································……46 4.3.5重组表达蛋白的sDs一以GE鉴定·······……46 4.3.6IPTG浓度的优化·……48 4.3.7诱导时间的优化·.·.···.····……49 4.3.8重组蛋白可溶性鉴定··········